[发明专利]一种基质辅助激光解析串联飞行时间质谱分析橡子中缩合单宁的分析方法

说明书

本发明公开了一种基于基质辅助激光解析串联飞行时间质谱分析橡子中缩合单宁的分析方法，采用橡子果实作为原料，包括以下步骤：1)提取，2)纯化，3)溶解，4)混合，5)，点样。本发明通过MALDI‑TOF MS技术，在反射模式和线性模式下对缩合单宁进行检测，分析缩合单宁的结构单元及结构单元的比例、缩合单宁中不同聚合度的聚合物分布信息，以获得完成可靠的缩合单宁MALDI‑TOF质谱信息。本发明提供的检测方法具有灵敏度高，准确率高，分辨率高、快速简便和高通量等。

技术领域

本发明属于橡子中缩合单宁检测的技术领域，具体涉及一种基质辅助激光解析串联飞行时间质谱分析橡子中缩合单宁的分析方法。

背景技术

橡子中不仅含有丰富的淀粉、蛋白质及脂肪等营养物质，还含有缩合单宁、鞣酸、黄酮类物质等多功能成分。缩合单宁具有极强的抗氧化活性，是一种良好的自由基清除剂和脂质过氧化抑制剂，可以与蛋白质等生物大分子通过非共价键或共价键形成复合物。缩合单宁也称原花色素，自然界中存在几种类型不同的缩合单宁，主要有原花青素、原翠雀定和原天竺葵定等，均由黄烷-3-醇形成。其中原花青素是由表/儿茶素为单位通过C4—C8或C4—C6骨架组成的低聚体与高聚体混合物。

目前，常用于单宁类物质分析的方法主要有紫外－可见光谱法、高效液相色谱法、质谱技术、核磁共振波谱法、红外吸收光谱法等。这些方法检测的单宁种类大部分为小分子的单宁，其检测到缩合单宁种类不全、信号偏弱，由此可见传统的检测方法对聚合度较大的缩合单宁的检测效果不佳。因此，如何建立一种高通量、快速检测橡子中缩合单宁的方法，成为急需解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种基质辅助激光解析串联飞行时间质谱分析橡子中缩合单宁的分析方法，该分析方法具有灵敏度高、特异性强、稳定性好的优点。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种基于基质辅助激光解析串联飞行时间质谱分析橡子中缩合单宁的分析方法，包括以下步骤：

1)提取：将橡子果实粉碎后经第一有机溶剂进行提取，得到缩合单宁的粗提液，蒸发除去所述缩合单宁的粗提液中的所述第一有机溶剂，得到缩合单宁的水相提取物，将所述缩合单宁的水相提取物冻干处理，得到缩合单宁粗提取物，向所述缩合单宁粗提取物当中加入第二有机溶剂，得到缩合单宁粗提取物溶液，所述第一有机溶剂和第二有机溶剂均为乙醇水溶液或丙酮水溶液，且第二有机溶剂浓度高于第一有机溶剂；

2)纯化：所述缩合单宁粗提取物溶液经纯化柱纯化处理后得到缩合单宁纯化物溶液，将所得缩合单宁纯化物溶液冻干处理，得到固体粉末为缩合单宁样品；

3)溶解：将所述缩合单宁样品溶于第三有机溶剂中，配制得到缩合单宁样品溶液，所述第三有机溶剂为50％～75％乙醇、30～75％丙酮溶液或50～70％乙腈溶液；所述缩合单宁样品溶液溶液浓度为5～20mg/mL；基质采用0.1％三氟乙酸和10％的乙腈溶液配制成饱和基质溶液，其中所述0.1％三氟乙酸的用量为所述基质重量的0.05～0.2倍，所述基质为α-氰基-4-羟基肉桂酸、2，5-二羟基苯甲酸或芥酸之中的一种；

4)混合：所述缩合单宁样品溶液和所述饱和基质溶液以1：2～5的体积比充分混合，得到混合溶液；

5)点样：取1～4μL混合溶液将其滴加在基质辅助激光解吸电离仪器(MALDI)的靶板上，利用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)对橡子中的缩合单宁进行分析。