[发明专利]一种微生物胞内大颗粒内含物的制备方法及其应用

权利要求书

1.提高微生物胞内内含物颗粒大小的方法，为如下（a1）-（a4）中的至少一种：

（a1）抑制微生物中PHA颗粒表面结合蛋白的编码基因表达；

（a2）降低微生物中PHA颗粒表面结合蛋白的表达量和/或活性；

（a3）抑制微生物中PHA颗粒表面结合蛋白的编码基因表达，同时过表达微生物中分裂环抑制蛋白的编码基因；

（a4）降低微生物中PHA颗粒表面结合蛋白的表达量和/或活性，同时提高微生物中分裂环抑制蛋白的表达量和/或活性；

所述（a1）或（a2）中，所述PHA颗粒表面结合蛋白为PhaP1蛋白、PhaP1蛋白和PhaP2蛋白的组合或PhaP1蛋白和PhaP3蛋白的组合；

所述（a3）或（a4）中，所述PHA颗粒表面结合蛋白为PhaP1蛋白，所述分裂环抑制蛋白为MinCD蛋白或MinC蛋白；

所述微生物为盐单胞菌（Halomonas sp.）。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述“抑制微生物中PHA颗粒表面结合蛋白的编码基因表达”或“降低微生物中PHA颗粒表面结合蛋白的表达量和/或活性”可以通过如下方式实现：利用CRISPR/Cas9敲除所述微生物基因组中PHA颗粒表面结合蛋白的编码基因；

所述“过表达微生物中分裂环抑制蛋白的编码基因”或“提高微生物中分裂环抑制蛋白的表达量和/或活性”可以通过如下（1）或（2）所述的方式实现：（1）向所述微生物中导入分裂环抑制蛋白的编码基因；（2）通过基因编辑将所述微生物基因组中分裂环抑制蛋白的编码基因前的启动子替换为组成型启动子。

3.权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述微生物胞内内含物为PHA。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述PHA包括PHB或P(3HB-co-4HB)。

5.重组微生物，是将出发微生物进行如下（b1）-（b4）中的任一种改造得到的；

（b1）抑制出发微生物中PHA颗粒表面结合蛋白的编码基因表达；

（b2）降低出发微生物中PHA颗粒表面结合蛋白的表达量和/或活性；

（b3）抑制出发微生物中PHA颗粒表面结合蛋白的编码基因表达，同时过表达出发微生物中分裂环抑制蛋白的编码基因；

（b4）降低出发微生物中PHA颗粒表面结合蛋白的表达量和/或活性，同时提高出发微生物中分裂环抑制蛋白的表达量和/或活性；

所述（b1）或（b2）中，所述PHA颗粒表面结合蛋白为PhaP1蛋白、PhaP1蛋白和PhaP2蛋白的组合或PhaP1蛋白和PhaP3蛋白的组合；

所述（b3）或（b4）中，所述PHA颗粒表面结合蛋白为PhaP1蛋白，所述分裂环抑制蛋白为MinCD蛋白或MinC蛋白；

所述微生物为盐单胞菌。

6.权利要求1至4任一所述的方法在制备微生物胞内内含物中的应用，所述微生物为盐单胞菌。

7.权利要求5所述的重组微生物在制备微生物胞内内含物中的应用，所述微生物为盐单胞菌。

8.（c1）或（c2）或（c1）和（c3）的组合或（c2）和（c4）的组合在制备微生物胞内内含物中的应用；

（c1）抑制微生物中PHA颗粒表面结合蛋白的编码基因表达的物质；

（c2）降低微生物中PHA颗粒表面结合蛋白的表达量和/或活性的物质；

（c3）过表达微生物中分裂环抑制蛋白的编码基因的物质；

（c4）提高微生物中分裂环抑制蛋白的表达量和/或活性的物质；

所述（c1）或（c2）中所述PHA颗粒表面结合蛋白为PhaP1蛋白、PhaP1蛋白和PhaP2蛋白的组合或PhaP1蛋白和PhaP3蛋白的组合；

所述（c3）或（c4）中，所述PHA颗粒表面结合蛋白为PhaP1蛋白，所述分裂环抑制蛋白为MinCD蛋白或MinC蛋白；

所述微生物为盐单胞菌。