[发明专利]一种条斑紫菜贝壳丝状体溶壳剂的应用

说明书

本发明提供一种条斑紫菜贝壳丝状体溶壳剂的应用，采用柏兰尼液作为溶壳剂，通过柏兰尼液浸泡条斑紫菜贝壳丝状体后进行病害组织病理观察；与现有技术相比，本发明的有益效果在于：确定柏兰尼液为最佳溶壳剂，浸泡柏兰尼液90s后刮取丝状体损伤较小，观察效果较好，为最佳作用时间。

技术领域

本发明涉及紫菜养殖的发育学及病害学领域，具体涉及一种紫菜贝壳丝状体的观察方法。

背景技术

紫菜养殖是我国水产养殖的重要组成部分，养殖产量和面积居世界第一。因其具有极高的营养价值，深受各国人民喜爱。紫菜生长在潮间带，能够吸收海水中大量的氮、磷，具有十分重要的生态意义。紫菜生活史分为二倍体的丝状体时期和单倍体的叶状体时期。其中丝状体能够溶解钙质，钻入表面富含钙质的贝壳中，形成贝壳丝状体渡过夏季高温。贝壳丝状体在秋季成熟膨大并释放壳孢子，其放散量和附着程度直接影响紫菜海区栽培生产的顺利进行。紫菜贝壳丝状体病害常发生于育苗中期，特别是高温天气，其传播速度快、影响范围广，对紫菜的育苗造成巨大损失。要观察患病贝壳丝状体组织病理情况，需将藻体尽可能无损伤、完整的从贝壳上刮下。

柏兰尼液(Perenyi’s solution)和醋酸海水是经常用于观察紫菜种苗培育的贝壳丝状体发育状态的试剂，对于判断壳孢子采苗时间、保证海区栽培生产的顺利进行具有重要意义。柏兰尼液能够溶解贝壳珍珠层，使藻丝层轻易刮下。本研究以条斑紫菜自由丝状体和贝壳丝状体为研究对象，以柏兰尼液作为溶壳试剂，观察不同浸泡时间对藻体的损伤情况，筛选最佳的浸泡时间，为贝壳丝状体病害组织病理观察提供技术支持。

将丝状体从贝壳中刮下是能对条斑紫菜贝壳丝状体组织病理观察的关键。一方面，柏兰尼液呈现强酸性，能够使贝壳表面的珍珠层变薄，也会引起碳酸钙晶体构型发生变化，导致丝状体附着不紧密[11]。另一方面，柏兰尼液能够引起细胞膜通透性发生变化[12-14]，可溶性糖类增加[15]，导致丝状体液泡内容物溶出，液泡消失，丝状体体积减小，与贝壳珍珠层间隙增大,使藻丝更易从贝壳上刮取。

光合作用是植物重要的基础生理过程，利用叶片将吸收的太阳能转化为自身生长发育所需的化学能，影响植物的生长发育。光系统II(PSII)是光合作用中吸收、转换及光合电子传递的重要部分。许多因素如重金属、干旱、盐胁迫及病原侵染等都会引起PSII活性和功能降低。光系统II最大光量子产量化效率(FV/FM)是一个物种恒定值，非胁迫条件下变化极小，不受物种和生长条件影响，胁迫条件下参数明显下降。为植物生长状态下产生的光量子，受实际生长环境影响。非光化学淬灭反映的是PSⅡ天线色素吸收的过量光能而以热的形式耗散掉的部分。如不能及时地耗散这部分光能，将会产生大量活性氧对光合机构造成失活或破坏，所以非光化学淬灭是一种自我保护机制，对光合机构起一定的保护作用。在严重胁迫条件下FV/FM、和NPQ下降，说明类囊体功能丧失，光合活性显著降低。这与柏兰尼浸泡后的变化趋势一致，说明柏兰尼液能破坏条斑紫菜贝壳丝状体光合系统，且浓度越高、浸泡时间越长，对丝状体的损伤越严重。

发明内容

为了解决现有紫菜贝壳丝状体观察困难的问题，我们提出了一种条斑紫菜贝壳丝状体溶壳剂的应用。

本发明是通过以下技术方案实现的：

为实现上述目的，本发明提供一种条斑紫菜贝壳丝状体溶壳剂的应用，采用柏兰尼液作为溶壳剂，通过柏兰尼液浸泡条斑紫菜贝壳丝状体后进行病害组织病理观察；其中柏兰尼液配方如下：

10％硝酸100-300ml，

95％酒精100-200ml，

0.5％铬酸100-200ml；

柏兰尼液的应用方法如下：

(1)条斑紫菜丝状体养殖条件：温度20℃，盐度28‰，光强20μmol/m2s，光周期L:D＝12:12，每3天换1次PES海水；