[发明专利]分泌抗狂犬病毒M蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及应用

说明书

本发明公开了一种分泌抗狂犬病毒M蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及应用，属于生物技术领域。所述杂交瘤细胞株的分类命名为杂交瘤细胞株4A1，于2019年4月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：C201947。该杂交瘤细胞株制备的单克隆抗体效价高，特异性好，生物学特性优良；鉴定了其识别RABV M蛋白的精细抗原变异表位，能够用于区分疫苗Flury毒株和其它RABV毒株；将其应用于制备检测狂犬病毒RABV的试剂盒，可以检测RABV感染以及鉴别诊断疫苗Flury毒株和其它RABV毒株。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种分泌抗狂犬病毒M蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及应用。

背景技术

狂犬病(Rabies)是由狂犬病毒(RABV)引起的一种高度致死性人畜共患传染病。RABV感染发病后，致死率几乎为100％，是迄今为止人类历史上死亡率最高的急性传染病。目前仍无任何治疗措施，只能通过疫苗免疫接种预防RABV感染。在全球范围内有150多个国家均有狂犬病病例报道，每年约有5～7万人死于狂犬病，其中95％的病例发生在非洲和亚洲。中国的人狂犬病感染病例仅次于印度，位于亚洲第二位。犬是RABV最常见的病毒储藏库，99％的人感染狂犬病是由犬传播介导的。

RABV在病毒分类学上属于弹状病毒科(Rhabdoviridae)狂犬病毒属(Lyssavirus)的成员，是单股副链非节段RNA病毒，其基因组主要编码核蛋白(N)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、糖蛋白(G)和RNA依赖的RNA聚合酶蛋白(L)。M蛋白，由202个氨基酸组成，约23kDa，是RABV病毒粒子最小、含量最丰富的一种非糖基化蛋白，其位于病毒囊膜和核衣壳之间，起到连接G蛋白和核衣壳的作用。M蛋白具有多种功能：参与病毒粒子的组装和出芽，对病毒粒子形态呈长杆状起到决定因素，调控病毒的转录和翻译过程，参与决定病毒的致病力，诱导细胞凋亡，抑制宿主相关基因的表达等。

目前已制备出的抗RABV蛋白的单克隆抗体主要是NP蛋白和G蛋白。NP蛋白单克隆抗体可用来区分狂犬病毒属不同血清型；G蛋白单克隆抗体则表现出较高的中和活性。RABVM蛋白的单克隆抗体报道很少，而且M蛋白单克隆抗体识别的精细表位还不清楚，缺乏对这些单克隆抗体生物学特性的了解，因此也限制了抗M蛋白单克隆抗体在病毒诊断中的应用，以及对M蛋白结构和抗原特性的研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能分泌特异性识别RABV M蛋白的单克隆单体的杂交瘤细胞株，其分泌的单克隆抗体能与RABV毒株发生特异性反应，不能与疫苗Flury毒株发生反应。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种分泌抗狂犬病毒M蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株的分类命名为杂交瘤细胞株4A1，于2019年4月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉、武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：C201947。

本发明首先从建立的杂交瘤细胞库中得到12株稳定分泌抗狂犬病毒RABV M蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，并最终筛选出杂交瘤细胞4A1株，其生物学特性优良。采用间接酶联免疫吸附分析法测得制备的小鼠腹水单克隆抗体4A1的效价为1×10⁵。

本发明还提供了由杂交瘤细胞4A1株制备得到的抗狂犬病毒M蛋白的单克隆抗体。

本发明首次鉴定了该单克隆抗体所识别的变异抗原表位，其氨基酸序列如SEQ IDNO:1和SEQ ID NO:2所示。该抗原表位在不同的RABV毒株M蛋白上相对保守，但在疫苗Flury毒株上存在抗原变异(Flury毒株氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示)，导致单克隆抗体不能识别。因此，本发明提供的单克隆抗体能与狂犬病毒毒株发生特异性反应，但是不能与疫苗Flury毒株反应。