[发明专利]一种检测特发性无精症的试剂盒及基因panel

说明书

本发明涉及基因检测技术领域，具体地说，是一种检测特发性无精症的试剂盒及基因panel。本发明利用患者少量(3ml)外周血提取DNA，经过建库，高通量测序等过程对患者的基因突变进行检测，并通过生物信息学分析，如突变频率、突变性质、生物学危害性、保守性等进行评估，发现了30个新的患者致病的基因突变。本发明只需提取患者3ml外周血，即可进行检测，且覆盖了多达30个检测位点，提高了突变的检出率，30个位点在一个反应体系中进行，大大减少了工作量，提高了工作效率，节约了工作时间。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体地说，是一种检测特发性无精症的试剂盒及基因panel。

背景技术

无精子症是引起男性不育的最严重的一种状况，核心特征主要为射出精液中无精子存在，据统计大约影响着全球1％的男性。无精症在病因上具有高度的异质性，众多研究已证实遗传异常是无精子症的重要致病因素，约占所有无精症病例的15％，已知病因包括Yq微缺失及Klinefelter综合征等。2015年Yatsenko,A.N.及其同事等在散发无精症患者群中发现TEX11罕见突变引起精子发生障碍，并在医学研究顶级学术期刊《柳叶刀》发表了成果。同期，还有众多研究，例如Fakhro,Khalid A及其同事等在6个近亲婚配的家系内的无精症患者兄弟中通过高通量全外显子测序发现了SPO11,WNK3,NANOS2,TEX14及CCDC155导致生精障碍的罕见基因突变等。因此证实了部分基因的罕见突变可导致无精症的发生，并且这些突变可以通过现有的测序技术发现。而目前临床上针对无精子症的检查主要包括：精液常规，性激素检查，阴囊超声，遗传学检查主要包括：染色体核型检查，Y染色体微缺失检查。这些经典的检查方法自20年前兴起且鲜有更新，不可否认其具有良好的效力，但仍有大约72％的无精症病例无法明确其具体病因，被称为特发性无精症，亟待发现新的分子诊断标记物。

随着人类基因组测序计划完成和高通量测序技术的发展，医学领域的科研工作者对人类基因组有了更深入的认识，对疾病遗传变异、致病基因的功能及作用机制的研究也逐渐深入。目前应用较为成熟的全外显子组测序技术，是利用外显子捕获试剂盒捕捉整个基因的外显子及其周边区域的基因序列，然后进行高通量测序，因其花费小，产出数据率用率高的特点在各种遗传疾病研究中崭露头角。近几年来，因测序成本由近万元大幅下降至钱百元水平，使得其作为临床常规检测成为可能。

中国专利文献CN201580000582.6公开了一种检测与特发性无精子症相关的遗传标记的试剂盒，该试剂盒包括引物对，上述遗传标记位于AR基因的编码区，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其中，所述序列的突变位点选自c.868T>C、c.1484G>A、c.1888C>T、c.569C>T、c.616A>G和c.1149C>T中的一个或多个；上述引物对的上游引物和下游引物分别位于上述突变位点的上游和下游。通过大规模测序在特发性无精子症病人中筛选出了AR基因的6个新的突变位点，研究表明AR基因的上述突变可能导致特发性无精子症的发生，从而能够通过使用试剂盒检测上述突变来实现对特发性无精子症的诊断检测。

中国专利文献CN201510220417.3公开了一种用于男性无精症诊断的试剂盒和使用方法。该试剂盒为用于测定血浆miR-15b的不同表达水平的生物标志物检测试剂，通过miR-15b的过高表达提示无精症，发现了一种在精子发生过程中起重要作用的微小RNA基因miR-15b，miR-15b在男性不育病人中的表达差异，并且可以在血浆中检测到其表达的显著变化。试剂盒基于定量PCR的原理，结果重复性好，客观准确，易于在不同的检测机构与医院检验科，男科实验室等推广。

但是关于本发明的检测特发性无精症的试剂盒及基因panel，目前还未见报道。

发明内容

本发明利用患者少量(3ml)外周血提取DNA，经过建库，高通量测序等过程对患者的基因突变进行检测，并通过生物信息学分析，如突变频率、突变性质、生物学危害性、保守性等进行评估，发现了30个新的患者致病的基因突变。