[发明专利]食树脂假单胞菌、冰片脱氢酶、含其的混合物及其应用

说明书

本发明提供一种新颖的食树脂假单胞菌、冰片脱氢酶、含其的混合物及其应用。本发明首先提供了一种食树脂假单胞菌(Pseudomonas resinovorans)菌株，其保藏编号为DSM 33074。此菌株表达一种特殊的冰片脱氢酶。该冰片脱氢酶可分解右旋冰片、右旋异冰片、左旋异冰片及右旋樟脑，藉此达到纯化左旋冰片及左旋樟脑的目的。

技术领域

本发明是关于一种食树脂假单胞菌(Pseudomonas resinovorans)、冰片脱氢酶、含其的混合物及纯其应用。具体来说，本发明是关于食树脂假单胞菌所表达的冰片脱氢酶，来分解右旋冰片、右旋异冰片及左旋异冰片，以纯化左旋冰片。

背景技术

冰片自古为一中药材，又称片脑、龙脑香、龙脑冰片、梅花脑、梅片，是龙脑香科常绿乔木植物龙脑香的树脂和挥发油加工品或是龙脑香的树干，经过蒸馏冷却中所提取获得的结晶。龙脑香的树脂和挥发油中含有多种萜类成分，如龙脑香醇酮、龙脑香二醇酮、古柯二醇等三萜化合物，但主要的化学成分为右旋冰片。近年亦可从樟科植物樟树的枝叶中取得少量的右旋冰片。左旋冰片作为右旋冰片的光学异构物，又称艾片，则可从菊科多年生草本植物艾纳香(大艾)中提取出来。

经研究指出，冰片对于中枢神经系统具有保护作用，可利用于，例如脑水肿的恢复与脑缺血后遗症。后续研究中更发现冰片可促进神经胶质细胞的分裂。此外，冰片还能用于抗菌、抗发炎与镇痛，并具有创伤愈合的功效。另一方面，研究亦指出，冰片有促进药物吸收的作用，对于经皮肤、眼角膜、鼻黏膜等给药途径都有帮助。

冰片可通过化学合成方法来取得。若以化学合成樟脑为起始物，经化学还原反应将樟脑的酮基还原成醇基即可得到化学合成冰片。由于作为反应起始物的化学樟脑包含右旋樟脑与左旋樟脑，其经还原反应后就会分别转换为右旋冰片((+)-borneol)与右旋异冰片((+)-isoborneol)以及左旋冰片((-)-borneol)与左旋异冰片((-)-isoborneol)等四种异构物。若以天然樟脑为起始物，由于天然樟脑主要成分是右旋樟脑，故经还原反应后只会得到右旋冰片((+)-borneol)与左旋异冰片((-)-isoborneol)的「半合成冰片」。

化学合成冰片合成反应式显示如下：

制备天然的冰片耗时费工，因而价格昂贵，故市面上贩卖的冰片多为化学合成冰片，其价格也较天然冰片来的低廉。有研究试验指出冰片的半数致死量低于异冰片的半数致死量，由此推论出化学合成冰片由于包含异冰片，使其毒性大于天然提取的冰片。因此，对于冰片此珍贵的中药材，仍有开发与研究其纯化与分离方法以提升医药领域中的应用性的需求。

发明内容

爰是，本发明的一个目的在于提供一种纯化左旋冰片的方法，以使化学合成冰片的后续利用更为便利，从而提供其产业价值。

为了达到上述目的，本发明首先提供了一种食树脂假单胞菌(Pseudomonasresinovorans)菌株，该菌株已于2019年02月27日保藏于Liebniz DSMZ研究所-德国微生物和细胞培养保藏中心(DSMZ)(地址：德国不伦瑞克D-38124，Inhoffen街道7B)，分类命名：食树脂假单胞菌(Pseudomonas resinovorans)，保藏编号：DSM 33074。保藏时保藏人对该菌株的自定义命名为TCU-CK1。另外，该菌株于财团法人食品工业发展研究所的保藏编号为BCRC910857。

本发明另提供一种冰片脱氢酶，其包含如SEQ ID NO.04或SEQ ID NO.05所示的序列。

藉由食树脂假单胞菌所表达的冰片脱氢酶，本发明再提供一种纯化左旋冰片的方法，其包含下列步骤：

(A)取得包含冰片异构物的混合物；其中所述冰片异构物包含左旋冰片及至少一种选自下列群组的冰片异构物：右旋冰片、右旋异冰片、及左旋异冰片；

(B)将所述混合物与食树脂假单胞菌共同培养；