[发明专利]含异二聚体抗体FC的蛋白及其制备方法

权利要求书

1.一种用于产生异二聚体蛋白的体外方法，所述方法包含以下步骤：

a)提供包含免疫球蛋白Fc区的第一同二聚体蛋白，所述Fc区包含第一CH3区，

b)提供包含免疫球蛋白Fc区的第二同二聚体蛋白，所述Fc区包含第二CH3区，

其中所述第一CH3区与第二CH3区的序列不同，并使得所述第一CH3区与第二CH3区之间的异二聚体相互作用强于所述第一CH3区与第二CH3区各自的同二聚体相互作用，

c)在足以允许铰链区的半胱氨酸经历二硫键异构化的还原条件下将所述第一蛋白与所述第二蛋白一起孵育，和

d)获得所述异二聚体蛋白。

2.权利要求1的体外方法，其中所述第一同二聚体蛋白和所述第二同二聚体蛋白选自(i) Fc区，(ii)抗体，(iii)包含Fc区的融合蛋白，和(iv)与前药、肽、药物或毒素缀合的Fc区。

3.权利要求1的体外方法，其中所述第一同二聚体蛋白是全长抗体。

4.前述权利要求中任一项的体外方法，其中所述第二同二聚体蛋白是全长抗体。

5.前述权利要求中任一项的体外方法，其中所述第一和第二同二聚体蛋白都是抗体且结合不同的表位。

6.前述权利要求中任一项的体外方法，其中第一同二聚体蛋白的Fc区是选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的同种型的，其中第二同二聚体蛋白的Fc区是选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的同种型的。

7.前述权利要求中任一项的体外方法，其中所述第一和所述第二同二聚体蛋白两者的Fc区都是IgG1同种型的。

8.前述权利要求中任一项的体外方法，其中所述同二聚体蛋白的一个Fc区是IgG1同种型的，另一个是IgG4同种型的。

9.前述权利要求中任一项的体外方法，其中与每种同二聚体相互作用相比的异二聚体相互作用强度增加是因为CH3修饰，而非因为引入共价键、半胱氨酸残基或荷电残基。

10.前述权利要求中任一项的体外方法，其中在所得异二聚体蛋白中所述第一蛋白与第二蛋白之间的异二聚体相互作用使得在实施例13描述的条件下在0.5 mM GSH下不会发生Fab臂互换。