[发明专利]一种抑制滴灌灌水器微生物堵塞的方法

权利要求书

1.一种抑制滴灌灌水器微生物堵塞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)采用发育分子生态网络分析确定导致滴灌灌水器堵塞的关键菌，然后进行抑制滴灌灌水器堵塞的拮抗菌筛选；

(2)将筛选出的拮抗菌于含有沼液的培养基中进行发酵，制备成拮抗菌剂；

(3)将拮抗菌剂应用于滴灌系统；

所述拮抗菌筛选的方法，包括以下步骤：

1)培养灌水器流道内附生生物膜，然后提取堵塞物质生物膜微生物；

2)提取生物膜中微生物的总DNA，扩增16S rRNA的V3-V4可变区，纯化，定量检测以及测序；

3)将生物膜微生物的测序结果用于构建发育分子生态网络，根据细菌之间的相关性，筛选出影响生物膜生长的关键菌；同时根据滴灌作物，选择具有生物防治功能的菌种作为备选菌，然后结合上述筛选出来的关键菌进行拮抗实验，筛选出备选菌中和关键菌出现拮抗作用的菌种作为拮抗菌；

所述发育分子生态网络的构建和分析方法为：首先对各菌种的OTU原始数据进行标准化处理后，利用MENA网络分析系统计算OTU节点之间的连接强度，然后进行可视化处理，得到网络结构图，找出其中与其他OUT链接数高的OUT，即为影响生物膜生长的关键菌；

所述具有生物防治功能的菌种包括：滴灌作物生育期间导致作物发病的病原菌和作物根部中促进作物生长的益生菌，所述病原菌包括细菌类、病毒类、真菌类，所述益生菌包括农杆菌、固氮菌、固氮螺菌、伯克氏菌、假单胞菌、微球菌、根瘤菌类或弗兰克菌；

利用滴灌灌水器抗堵塞性能综合测试装置进行生物膜培养；

所述拮抗菌剂的制备方法包括以下步骤：将新鲜沼液进行浓缩，然后将沼液和拮抗菌进行发酵培养，制备拮抗菌剂；

所述浓缩的方法包括：将新鲜沼液，在真空状态下置入反应釜中进行浓缩，浓缩压力为1×10⁵ Pa，浓缩至沼液含水率为60％；

将沼液和拮抗菌进行发酵培养的方法包括：按照重量份数计，将拮抗菌15～20份、亚硒酸钠0.4～0.8份、红糖6～8份加入75～85份沼液中，在25-28℃温度条件下均匀搅拌并且发酵4-10天，得到液体菌肥，向液体菌肥中施加微纳米气泡，得到拮抗菌剂；

将拮抗菌剂应用于滴灌系统的方法包括：在灌水器平均流量下降25％时或系统累积运行100h后，将制作的拮抗菌剂与滴灌水源按照体积比1:500-1500比例混合，输入滴灌系统；

所述将拮抗菌剂应用于滴灌系统的方法还包括：进行周期性施加，施加频率为1次/1～2周，每次施加2～3h。