[发明专利]高效降解菌核净的单胞属菌酶剂的制备方法及应用在审
| 申请号： | 201910244010.2 | 申请日： | 2019-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN109971679A | 公开（公告）日： | 2019-07-05 |
| 发明（设计）人： | 吴小毛;张承;李姣红;龙友华;李荣玉;王秋萍;代园凤;黄文源 | 申请（专利权）人： | 贵州大学 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N9/00;C02F3/34;B09C1/10;C12R1/01;C02F101/38;C02F101/34 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 李余江;程新敏 |
| 地址： | 550025 贵州省贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 单胞 高效降解 降解酶 菌核净 制备 菌酶 植物体 应用 超声破碎 环境友好 大白菜 菌悬液 速效性 异菌脲 菌酮 扩繁 生菜 马铃薯 菌种 番茄 韭菜 黄瓜 辣椒 水体 油菜 烟草 土壤 | ||
1.一种高效降解菌核净的单胞属菌酶剂的制备方法，其特征在于：其以单胞属菌Brevundimonas naejangsanensis为菌种，经菌悬液扩繁和降解酶剂超声破碎提取制备而得单胞属菌降解酶剂。
2.根据权利要求1所述的高效降解菌核净的单胞属菌酶剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)菌悬液制备：无菌条件下加入无菌磷酸盐缓冲液于菌种培养皿中平行振荡，并用接种环轻轻刮落培养基表面的菌落，即成粗制菌悬液，将其转移到液体发酵培养基中在pH为7.5～8，30～35℃，150～200rpm条件下培养48～56h；将取出的发酵液立即在8000～10000r/min下离心10～15min，收集湿菌体，并用无菌磷酸盐缓冲液冲洗3次；然后将无菌磷酸盐缓冲液与湿菌体混匀，控制菌体数量为≥6×1010cfu/mL；制得的菌悬液3～4℃保存备用。
2)游离酶提取：对步骤1)制得的菌悬液进行超声破碎提取游离酶，超声破碎时间10～15min，功率320W，每10s一个周期；破碎液在8000～10000r/min，3～4℃下离心10～15min，得上清液即制得游离酶；上清液游离酶含量控制在大于等于3.00mg/mL。
3.根据权利要求2所述的的高效降解菌核净的单胞属菌酶剂的制备方法，其特征在于：所述液体发酵培养基由以下原料按比例制得：麦芽糖7g/L、酵母膏6g/L、NaCl 3g/L。
4.一种如权利要求1或2的方法制备的高效降解菌核净的单胞属菌酶剂的应用，其特征在于：所述高效降解菌核净的单胞属菌酶剂应用于高效降解包括油菜、大白菜、紫菜苔、生菜、韭菜、黄瓜、番茄、辣椒、马铃薯、烟草在内的植物体中以及土壤和水体中的菌核净，或者应用于高效降解植物、土壤和水体中的烯菌酮和异菌脲。
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