[发明专利]sgRNA序列及利用CRISPR-Cas9技术制备RH阴性红细胞的方法

权利要求书

1.一种RH阴性干细胞的制备方法，其特征在于，包括：

将表达载体导入到干细胞中，筛选单细胞克隆，扩大培养获得RH阴性干细胞，所述表达载体含有SEQ ID NO:1所示核酸序列，所述表达载体能够编码sgRNA序列，所述sgRNA序列为SEQ ID NO:19所示的核酸序列，

所述干细胞选自商品化胚胎干细胞、诱导多能干细胞或者造血干/祖细胞中的至少一种。

2.一种RH阴性红细胞的制备方法，其特征在于，包括：

获得RH阴性干细胞；

利用RH阴性干细胞进行诱导分化，获得经诱导分化的RH阴性红细胞；

对所述经诱导分化的RH阴性红细胞进行脱核培养，获得成熟的RH阴性红细胞，

其中，所述RH阴性干细胞通过权利要求1所述的制备方法获得。

3.根据权利要求2所述的RH阴性红细胞的制备方法，其特征在于，利用分化培养基对所述RH阴性干细胞进行所述诱导分化，所述分化培养基包括StemSpan无血清培养基、人促红细胞生成素(EPO)、干细胞生长因子(SCF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、转铁蛋白、地塞米松(Dex)和L-谷氨酰胺。

4.根据权利要求2所述的RH阴性红细胞的制备方法，其特征在于，利用脱核培养基对所述经诱导分化的RH阴性红细胞进行脱核培养，所述脱核培养基包括RPMI1640无血清培养基、转铁蛋白、重组人胰岛素，肝素、血浆和血清。