[发明专利]多色荧光染料和荧光蛋白标记样本的塑性包埋方法

说明书

本发明揭示了一种适用于多色荧光染料以及荧光蛋白标记样本的塑性包埋方法，包括：将荧光标记的生物组织样本进行预处理；依次放入不同浓度TB的树脂溶液中梯度渗透，每个浓度1h‑2h,之后作用浓度TB的树脂溶液中渗透12‑24h；用树脂渗透液对上述所述的经梯度处理的样本进行包埋、加热聚合后，得到包埋的荧光标记样本。本发明以TB作为背景抑制剂，可以抑制背景光，且可以兼容多色荧光染料和荧光蛋白的使用。本发明所提供的包埋方法，适用于多种树脂包埋，同时适用于多种荧光染料以及荧光蛋白标记的样本。

技术领域

本发明涉及生物医学工程技术领域，具体涉及一种多色荧光染料标记样本塑性包埋方法。

背景技术

目前，通过荧光蛋白以及荧光染料标记技术，可以同时获取荧光蛋白以及荧光染料标记信息，对深入研究生物组织的结构和功能与疾病等关系有着重要的作用。

现有的包埋方法，采用纯树脂或者溶解了SBB和DTT的树脂样本渗透包埋荧光生物组织，可包埋多种颜色荧光蛋白标记的生物组织，例如绿色/红色/蓝色荧光蛋白标记的组织，它的不足之处在于：这种包埋方法不适于各种荧光染料标记生物样本，从而大大限制了其应用，例如采用SBB作为背景抑制剂，但SBB在红色及红外波段有自发荧光，限制了其在多色特别是红色荧光蛋白以及多种荧光染料样本中的使用。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术存在的不足，提供一种适用于多种荧光染料和荧光蛋白标记样本的塑性包埋方法。

为解决以上技术问题，本发明的技术方法包括：

将生物组织样本进行预处理；

将预处理后的生物组织样本依次放入0。5-95wt%的梯度浓度酒精中进行渗透，每个梯度0。5-3小时，随后分别在含0。7-1wt/%TB不同质量浓度的梯度树脂中渗透6-24小时；

用树脂渗透液对所述经梯度浓度渗透后的样本进行包埋、加热聚合后得到包埋的荧光染料标记样本。

优选的，所述对生物样本进行预处理包括：

将生物样本在多聚甲醛固定液中固定12-24小时；

将固定后的生物样本在漂洗液中漂洗6-12小时；

将所述漂洗后的生物样本依次放入冰水预冷却的50%、70%乙醇溶液中进行梯度脱水，再在95%或100%乙醇溶液中进行脱水，每次5分钟到2小时。

优选的，所述不同质量浓度的梯度树脂的质量浓度为第一梯度40%~60%、第二梯度60%~70%、第三梯度70~90%和第四梯度90%~100%。

优选的，所述不同浓度的树脂溶液的质量浓度分别为第一梯度50%、第二梯度70%、第三梯度85%和第四梯度100%。

优选的，所述梯度浓度酒精溶液的质量浓度分别为50%、70%、85%和100%。

优选的，所述用树脂渗透液对所述经梯度渗透后的生物样本进行包埋具体为：将梯度渗透后的生物样本放置于包埋模具中，随后在模具中充满包埋树脂液。

优选的，所述树脂渗透液和包埋树脂溶液中的树脂具体为GMA树脂。

优选的，加热后得到包埋的荧光染料标记样本具体为：将所述填充后的模具在35℃-40℃下加热12到24小时。

优选的，所述树脂溶液的溶剂为95%乙醇。

优选的，所述生物样本选自荧光探针标记的生物样本。