[发明专利]Mir3061基因Rosa26定点敲入杂合子小鼠模型构建方法与应用有效
| 申请号： | 201910240768.9 | 申请日： | 2019-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN109943593B | 公开（公告）日： | 2021-12-24 |
| 发明（设计）人： | 刘特;郑锦;陈川;郁志华;林佳佳 | 申请（专利权）人： | 上海市中医老年医学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 上海顺华专利代理有限责任公司 31203 | 代理人： | 陆林辉 |
| 地址： | 200031 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | mir3061 基因 rosa26 定点 敲入杂 合子 小鼠 模型 构建 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.Mir3061基因的Rosa26定点敲入杂合子小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法为：利用CRISPR/Cas9技术构建Mir3061基因的Rosa26定点敲入杂合子小鼠模型；该方法包括以下步骤：
A、确定小鼠5号和3号染色体上的Rosa26基因所在位点为site1如SEQ ID NO：2所示；
设计gRNA1的设计识别位点如SEQ ID NO：3所示；
B、构建表达gRNA1的表达载体；
C、将步骤B得到的表达gRNA1表达载体，以及含Cas9基因的表达载体共转染C57BL/6J小鼠的受精卵中，经长片段PCR鉴定，获得F0代小鼠；
D、F0代小鼠与C57BL/6J小鼠交配获得阳性F1代小鼠。
2.根据权利要求1所述Mir3061基因的Rosa26定点敲入杂合子小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤C中PCR鉴定的检测引物序列分别如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。
3.根据权利要求1所述Mir3061基因的Rosa26定点敲入杂合子小鼠模型的构建方法构建得到的小鼠模型在筛选制备检测或治疗生殖发育疾病药物中的应用。
4.根据权利要求1所述Mir3061基因的Rosa26定点敲入杂合子小鼠模型的构建方法构建得到的小鼠模型在筛选制备检测或治疗卵巢疾病药物中的应用。
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