[发明专利]猪塞内卡病毒GD-SVA-2018株及其应用

说明书

本发明公开了一种猪塞内卡病毒GD‑SVA‑2018株，所述病毒株的全基因序列如SEQ ID NO：2所示。本发明采用PCR方法对广东地区采集的疑似SVA病料进行PCR检测，经PCR证实为猪塞内卡病毒(SVA)，采用仓鼠肾细胞(BHK‑21)细胞分离培养，分离培养出1株BHK‑21传代细胞培养适应毒株，命名为GD‑SVA‑2018株。通过将猪塞内卡病毒GD‑SVA‑2018株灭活病毒液与油乳剂201混合制成灭活疫苗，所述疫苗免疫2月龄母猪28d后，采血测中和抗体效价可达1:256以上，几何平均为1:256～1:512之间，具有良好的免疫原性，具有较大的应用前景。

技术领域

本发明涉及兽医生物学技术领域，更具体地，涉及一株猪塞内卡病毒GD-SVA-2018株及其应用。

背景技术

猪塞内卡病毒(Senecavirus A，SVA)也称为塞尼卡谷病毒(Seneca Valleyvirus，SVV)，是单股正链RNA病毒，属于小RNA病毒科，是塞内卡病毒属的唯一成员。猪塞内卡病毒感染具体症状表现为病猪鼻吻部、蹄冠部出现水疱，同时病猪伴有厌食、跛行、发烧、嗜睡等症状。新生仔猪感染SVA与成年猪不同，某些仔猪被报道患有腹泻(许多病毒均能引起临床症状)，而不引起鼻和蹄出现病变。在2002年，美国一家公司的科研人员在胚胎视网膜细胞(PER.c6)培养腺病毒室发现存在未知病原体污染，经病原分离鉴定得到并命名该病原体为SVV-001。SVV-001最初被用来研究主要集中于其抗神经内分泌源性肿瘤的作用，研究人员将其应用于治疗不同类型的肿瘤。直到2007年和2012年加拿大和美国相继发生的猪原发性水疱病(PIVD)的致病病原都被诊断为SVA。在2014年后，巴西和美国相继出现几次严重的感染症状，并导致巨大经济损失，该病才逐渐被重视。2015年，中国首次从广东PIVD猪场爆发的样本中检测出SVA，感染母猪起泡的临床症状和感染仔猪的急性死亡。近年来，SVA病例爆发性增加，虽然SVA不像口蹄疫一样属于一类动物疫病，但我们对SVA的研究还不够彻底，SVA对猪存在潜在的威胁。我们需要对SVA病毒的感染机制和遗传进化分析进行更深入的研究。同时，有必要制定预防SVA病毒感染的措施。

另一方面，疫苗是预防病毒的最有效措施，其中灭活疫苗在传染病的预防中发挥着重要作用。但是目前还未见有效的塞内卡病毒疫苗可以使用，也没有其他有效的治疗手段，因此迫切需要一种可用于防治猪塞内卡病毒病的疫苗。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的上述不足和缺陷，提供一种猪塞内卡病毒GD-SVA-2018株

本发明的另一目的在于提供所述猪塞内卡病毒GD-SVA-2018株在制备猪塞内卡病毒灭活疫苗中的应用。

本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：

猪塞内卡病毒GD-SVA-2018株，所述病毒株的全基因序列如SEQ ID NO：2所示，为7220bp。

本发明采用PCR方法对广东地区采集的疑似SVA病料进行PCR检测，经PCR证实为猪塞内卡病毒(SVA)，采用仓鼠肾细胞(BHK-21)细胞分离培养，分离培养出1株BHK-21传代细胞培养适应毒株，命名为GD-SVA-2018株。

本发明通过观察细胞病变、生物学特性研究等途径证实分离的病毒为猪塞内卡病毒后设计扩增GD-SVA-2018株全部结构基因序列的9对引物，通过重叠PCR测序得出GD-SVA-2018中间序列，两端序列则通过经过PCR扩增，胶回收，加polyA，连接T载体，转化，提取质粒等过程，送公司测序，最后通过生物学软件拼接得到GD-SVA-2018株全部结构基因序列。

本发明还提供所述猪塞内卡病毒GD-SVA-2018株的繁殖方法，包括如下步骤：