[发明专利]可同时识别克百威及其代谢物的抗体及其制备方法和应用有效
申请号: | 201910239341.7 | 申请日: | 2019-03-27 |
公开(公告)号: | CN109942711B | 公开(公告)日: | 2020-09-11 |
发明(设计)人: | 赵洪伟;兰坚强;孙蔚名 | 申请(专利权)人: | 海南大学 |
主分类号: | C07K16/46 | 分类号: | C07K16/46;C07D307/86;G01N33/543;C07K14/765;C07K14/77 |
代理公司: | 深圳市千纳专利代理有限公司 44218 | 代理人: | 张新蕊 |
地址: | 570228 *** | 国省代码: | 海南;46 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 同时 识别 克百威 及其 代谢物 抗体 制备 方法 应用 | ||
1.一种可用于制备可同时识别克百威和三羟基克百威的特异性抗体的半抗原,其特征在于,其分子结构式为式(2)所示:
。
2.一种可用于制备可同时识别克百威和三羟基克百威的特异性抗体的抗原,其特征在于,其分子结构式为式(1)所示,由式(2)所示半抗原与载体蛋白偶联得到:
,
。
3.一种可同时识别克百威和三羟基克百威的特异性抗体,其特征在于,由下述分子结构式所示的抗原免疫动物,利用有限稀释法对阳性孔进行克隆化,得到分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备得到:
。
4.一种特异性克百威和三羟基克百威检测试纸条,其特征在于,其含有权利要求3所述的特异性抗体。
5.一种特异性克百威和三羟基克百威酶联免疫试剂盒,其特征在于,其含有权利要求3所述的特异性抗体。
6.一种如权利要求1所述的半抗原的制备方法,其特征在于,取三羟基克百威,加入二氯甲烷溶解,加入丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶,室温反应完全,经纯化后,得到权利要求1所述的克百威半抗原,其中,三羟基克百威、丁二酸酐和4-二甲氨基吡啶的用量比为:23.7mg︰10-50mg︰12.2-122mg。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,三羟基克百威、丁二酸酐和4-二甲氨基吡啶的用量比为:23.7 mg︰35 mg︰25 mg。
8.一种制备如权利要求2所述的抗原的方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤a,取权利要求1所述的半抗原,加入无水二甲基甲酰胺(DMF)混匀后,加入二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS),室温反应过夜,其中,半抗原、二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的用量比为:0.10 mmol︰0.10-0.20mmol︰0.10-0.20mmol;
步骤b,离心,取溶液,将溶液缓慢加入载体蛋白溶液中,所用载体蛋白的量按照半抗原与载体蛋白的摩尔比15-40︰1计;
步骤c,反应完全后,透析,得到抗原。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,步骤a中,半抗原、二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的用量比为:0.10 mmol︰0.20mmol︰0.10mmol。
10.权利要求3所述的特异性抗体、或权利要求4 所述的特异性克百威和三羟基克百威检测试纸条、或权利要求5所述的特异性克百威和三羟基克百威酶联免疫试剂盒在检测样品中克百威和/或三羟基克百威残留的应用。
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