[发明专利]一种从野马追中分离纯化黄酮类化合物的方法

说明书

本发明涉及一种从野马追中分离纯化黄酮类化合物的方法，取干燥的野马追粉碎，加入80‑95％乙醇溶液加热回流或常温浸提，将提取液过滤后减压浓缩，得乙醇提取物，将乙醇提取物分散于蒸馏水中，依次用萃取溶剂石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，最后真空浓缩正丁醇萃取相，得到正丁醇萃取物，对其采用高速逆流色谱仪进行分离，根据色谱图收集相应峰组分，减压浓缩干燥即可得到高纯度的泽兰叶黄素、线蓟素和棕矢车菊素。本发明方法具有高效快速、成本低廉、分离量大、样品损失小、产品纯度高等优点，并且操作简单、重现性好，具有很好的推广使用价值。

技术领域

本发明涉及一种从野马追中分离纯化黄酮类化合物的方法，尤其是一种从野马追中分离纯化泽兰叶黄素、线蓟素和棕矢车菊素的方法，属于天然药物化学领域。

背景技术

中药野马追为菊科植物轮叶泽兰(Eupatorium lindleyanum DC.)的干燥地上部分，其味苦，性平，有清肺止咳、化痰平喘、抗菌消炎、利尿消肿、降血压等功效，临床主要用于治疗气管炎、咳嗽痰多、高血压等病症。野马追全草所含化学成分以黄酮类化合物为主，还有生物碱类、挥发油和香豆素、倍半萜类酯等。黄酮类化合物具有显著的生理及药理活性，例如抗自由基、抗肿瘤、抗病毒、抗炎、保护心血管系统、改善记忆、抗抑郁和保护神经系统等功效，其制备的制剂，对心脑血管、动脉硬化、“三高”等疾病有治疗有价值且长期服用无毒副作用。为全面充分开发利用这一宝贵中药资源，所以从野马追中提取纯化出黄酮单体化合物有很重要的意义。

目前，从野马追中分离纯化黄酮化合物主要采用的是柱层析方法。例如，吴双庆等[野马追化学成分，中国中药杂志,2012年第7期]反复采用硅胶、Sephadex LH-20等柱色谱方法对野马追95％乙醇浸膏的乙酸乙酯萃取部位进行分离纯化，分离出泽兰叶黄素、棕矢车菊素、槲皮素、线蓟素等16个化合物；钱士辉等[野马追中黄酮类成分的研究，中国中药杂志,2004年第1期]通过溶剂萃取、硅胶柱层析和重结晶等方法,分离得到棕矢车菊素、槲皮素等六种化合物。上述方法都需要反复进行柱层析，操作复杂，耗时长，溶剂消耗量大，而且样品损失大。

高速逆流色谱(High-Speed Counter-Current Chromatography，HSCCC)是一种连续高效的液-液色谱分离技术，由于HSCCC不需任何固体支撑体作为固定相，物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现，因此避免了样品的吸附、污染、变性和峰形拖尾等问题，具有高效、快速和制备大、费用低等优点，因而近年来日益受到人们的关注，已经广泛应用于生物医药、生物工程、植化、化工、环境、食品和化妆品等领域。本发明人利用高速逆流色谱从野马追中分离制备棕矢车菊素、泽兰叶黄素、线蓟素等黄酮类化合物，目前尚未见国内外有关文献和专利报道。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中采用柱层析从野马追中分离纯化黄酮化合物方法存在的不足，提供一种操作简便、成本低廉、分离量大、产品纯度高、样品损失小的从中药野马追中分离纯化泽兰叶黄素、线蓟素和棕矢车菊素的方法。

技术方案

一种从野马追中分离纯化黄酮类化合物的方法，包括如下步骤：

(1)取干燥的野马追粉碎，接着以体积浓度80-95％的乙醇溶液作为提取溶剂进行提取，得到提取液，将提取液过滤，然后将滤渣重复处理2-4次，合并滤液并减压浓缩，得到乙醇提取物；

(2)将乙醇提取物分散于蒸馏水中，得到乙醇提取物的水混悬溶液，然后依次用萃取溶剂石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，最后真空浓缩正丁醇萃取相，得到正丁醇萃取物；

(3)采用体积比3:4:3:4的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂体系，上相为固定相，下相为流动相，对正丁醇萃取物进行HSCCC分离，紫外检测器在线监测，分别收集不同馏分减压干燥，即得泽兰叶黄素、线蓟素和棕矢车菊素。