[发明专利]一种提高脱氮假单胞杆菌产维生素B12的方法在审
| 申请号： | 201910238608.0 | 申请日： | 2019-03-27 |
| 公开（公告）号： | CN109837320A | 公开（公告）日： | 2019-06-04 |
| 发明（设计）人： | 刘瑞艳;马杰希;刘伟;张彩霞;寇凤雨 | 申请（专利权）人： | 山东泓达生物科技有限公司;山东昆达生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12P19/42 | 分类号： | C12P19/42;C12N1/20;C12R1/38 |
| 代理公司： | 青岛高晓专利事务所(普通合伙) 37104 | 代理人： | 吴冬群 |
| 地址： | 276400*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 维生素 假单胞杆菌 脱氮 发酵过程 生物发酵技术 补料培养基 摇瓶培养基 发酵单位 发酵体系 发酵条件 菌体生长 生产菌株 生产效率 实验优化 培养基 速率和 菌形 母瓶 菌种 发酵 能耗 合成 生长 节约 积累 | ||
1.一种提高脱氮假单胞杆菌产维生素B12的方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1、母瓶培养过程控制：将活化的脱氮假单胞杆菌二代斜面刮取适量菌体接种于母瓶培养基中，温度控制在27 - 29℃，湿度控制在30 - 60%，培养时间为18 - 24h小时；
S2、摇瓶培养过程控制：将符合标准的脱氮假单胞杆菌母瓶培养基在无菌条件下接入摇瓶培养基，接种量为10%，发酵前期（0-39h）摇床温度控制在26-30℃；发酵中后期（39-170h）摇床温度控制在30-34℃，湿度控制在30 - 60%；培养时间为170h；
S3、补料控制：步骤S2的发酵过程中，分别于第3d、4d、5d时检测总糖含量，当总糖含量低于5%进行补料，维持发酵液总糖含量控制在5-7%，至发酵结束，从发酵液中分离纯化出维生素B12。
2.如权利要求1所述的一种提高脱氮假单胞杆菌产维生素B12的方法，其特征在于：所述步骤S1中母瓶培养基的配制步骤包括：分别称取甜菜糖蜜（50％）110g、磷酸氢二钾0.60g，硫酸铵0.81g、硫酸镁1.65g、硫酸锰0.15g、硫酸锌0.02g、氯化钴0.02g、前体0.012g，溶解并定容至1000mL，用20％ NaOH溶液调节pH，消前6.80-7.40，每个300mL三角瓶分装60mL，包扎，经灭菌（0.11-0.12MPa，121℃，30min）后制成母瓶培养基。
3.如权利要求1所述的一种提高脱氮假单胞杆菌产维生素B12的方法，其特征在于：所述步骤S2中摇瓶培养基的配制步骤骤包括：分别称取甜菜糖蜜（50％）170g、蔗糖15g、氯化胆碱10.30g、硫酸铵2.60g、硫酸镁1.65g、硫酸锌0.08g、氯化钴0.14g、前体0.01g、甘油1.55g、甘油磷酸7g，溶解并定容至1000mL，用20％ NaOH溶液调pH，消前6.80-7.40，每个300mL三角瓶分装37mL，包扎，经灭菌（0.11-0.12MPa，121℃，30min）后制成摇瓶培养基。
4.如权利要求1所述的一种提高脱氮假单胞杆菌产维生素B12的方法，其特征在于：所述步骤S3中补料培养基的配制步骤包括：分别称取蔗糖 300g，DMBI 0.20g，CoCl2·6H2O0.23g，溶解并定容至1000mL，调节pH至6.80-7.40，经灭菌（0.11-0.12MPa，121℃，30min）后制成补料培养基。
5.如权利要求1所述的一种提高脱氮假单胞杆菌产维生素B12的方法，其特征在于：所述步骤S2中符合标准的脱氮假单胞杆菌母瓶培养基的特征为：无杂菌，OD 值为0.207-0.220。
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