[发明专利]油菜花总黄酮的纯化方法

说明书

本申请提供了一种使用大孔树脂从油菜花总黄酮提取液纯化油菜花总黄酮的方法，其中所用的大孔树脂为AB‑8，洗脱步骤中使用的洗脱剂为浓度为50％的乙醇。

发明领域

本发明涉及植物黄酮类代谢产物提取纯化领域，具体地，本发明涉及一种使用AB-8大 孔树脂纯化油菜花总黄酮的方法。

背景技术

黄酮类化合物是广泛存在于多种植物中的植物次生代谢活性产物，其为天然的抗氧化 剂，根据研究黄酮类化合物具有清除人体中自由基、增强免疫力、降低血糖和血脂等生物学 活性，在食品、药品、化妆品、保健品方面都有广阔的应用前景。油菜是世界范围内广泛种 植的花卉和油料作物，油菜花中黄酮类化合物种类多样且含量丰富，是药用、食品用总黄酮 的低成本良好来源。

目前油菜花中黄酮类化合物提取常用加热回流粗提方法(如CN 105769967A)，也有使 用超声波提取油菜花花粉中总黄酮的记载，上述方法效率高但无法有效去除色素、蛋白、脂 质、糖类等杂质，对于科研和精细医药保健产品的制备不利。常规层析类精密提取方法则在 成本上无法满足药用、特别是大量食品用的需求。大孔树脂是近年来发展起来的一类有机高 分子聚合物吸附剂，其理化性质稳定，不溶于酸碱及有机溶剂，不受无机盐类及强离子、低 分子化合物的干扰，吸附效果好，再生简便，使用周期长，适合用于总黄酮类天然产物的分 离纯化。

发明内容

申请人研究了多种不同大孔树脂对油菜花粗黄酮的吸附、解吸动力学特征，选择了适合 纯化油菜花总黄酮的大孔树脂，并在此基础上优化了样品浓度、样品pH、流速、洗脱剂浓 度、洗脱剂体积等因素，构建了使用大孔树脂高效纯化油菜花总黄酮的方法。申请人意外地 发现，大孔树脂纯化的油菜花总黄酮不仅得到了有效纯化，而且其具有超过一般黄酮类化合 物提取物的抗氧化能力，在等浓度情况下甚至超过了Vc和Trolox，是一种廉价和高效的抗 氧化剂来源，有望取代部分Vc的应用。

一方面，本申请提供了一种使用大孔树脂从油菜花总黄酮提取液纯化油菜花总黄酮的方 法，包括制备油菜花总黄酮提取液、大孔树脂吸附和洗脱步骤，所用的大孔树脂为：D101、 AB-8或DM1303。

进一步地，所用的大孔树脂为：AB-8。

进一步地，洗脱步骤中使用的洗脱剂为浓度为50％的乙醇。

进一步地，油菜花总黄酮提取液的制备方法为：将新鲜油菜花置于60℃鼓风干燥箱中 干燥至恒重，粉碎过60目筛。准确称取油菜花粉末一定量，按料液比1:16加入73％乙醇溶 液，于73℃加热回流60min，抽滤，得到油菜花黄酮提取液，将提取液黄酮含量调整至1mg/mL，pH调至5。

进一步地，大孔树脂吸附步骤为：将AB-8大孔树脂以95％乙醇浸泡树脂24h充分溶胀 后湿法装柱；以95％乙醇冲洗至流出液加水至乙醇：水＝1:5不显浑浊为止，然后以蒸馏水洗 去乙醇，至水洗液无醇味为止，依次用2BV5％NaOH溶液、蒸馏水、2BV5％HCl溶液、蒸馏水冲洗，最后至中性；以2mL/min流速上样。

进一步地，洗脱步骤为：使用5BV体积浓度为50％的乙醇，以0.5mL/min流速洗脱。

另一方面，本申请提供了大孔树脂AB-8在纯化油菜花总黄酮中的应用。

进一步地，该应用中使用浓度为50％的乙醇从大孔树脂AB-8上洗脱油菜花总黄酮。

另一方面，本申请提供了使用上述方法纯化的油菜花总黄酮。

另一方面，本申请提供了上述油菜花总黄酮作为抗氧化剂的应用。

本申请的方法适用于各种产地和具体品种的油菜花，包括但不限于甘蓝型油菜、白菜型 油菜、芥菜型油菜。

本申请的方法中使用的大孔树脂、乙醇等试剂以及回流提取、柱等设备可以采用各种来 源的产品，只要其符合规格和要求。