[发明专利]一种利用紫外诱变筛选富硒螺旋藻突变株的方法及其获得的菌株和应用在审
| 申请号： | 201910232994.2 | 申请日： | 2019-03-26 |
| 公开（公告）号： | CN109913444A | 公开（公告）日： | 2019-06-21 |
| 发明（设计）人： | 张宝龙;郑国清;黄开耀 | 申请（专利权）人： | 恩施藻缘硒肽生物科技有限公司;中国科学院水生生物研究所 |
| 主分类号： | C12N13/00 | 分类号： | C12N13/00;C12N1/20;A23L33/16;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 杨采良 |
| 地址： | 445000 湖北省恩施土家族苗族*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 突变株 富硒螺旋藻 螺旋藻 紫外诱变筛选 菌株 应用 细胞 固体平板 亚硒酸钠 紫外诱变 超声波 传统的 计数法 能力强 涂布法 补硒 富集 耐受 突变 破碎 致死 筛选 | ||
1.一种利用紫外诱变筛选富硒螺旋藻突变株的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
(1)取钝顶螺旋藻，先在低浓度亚硒酸钠的培养基中培养，再依次转接到浓度依次递增的高浓度亚硒酸钠的培养基中，直至得到耐受470mg/L亚硒酸钠的钝顶螺旋藻；
(2)将步骤(1)所得耐受470mg/L亚硒酸钠的钝顶螺旋藻超声破碎成单细胞、二细胞或三细胞的藻液；
(3)将步骤(2)所得藻液离心后收集沉淀，并用培养基将沉淀稀释；
(4)将步骤(3)稀释后的藻液装于平板表面，用紫外光照射至致死率＞90％，然后转移至黑暗条件下，过夜；
(5)收集步骤(4)过夜后的藻液、离心、将所得沉淀转移至高亚硒酸钠浓度的培养基中培养，存活下来的细胞即为富硒螺旋藻突变株。
2.根据权利要求1所述利用紫外诱变筛选富硒螺旋藻突变株的方法，其特征在于：步骤(1)所述低浓度亚硒酸钠培养液的浓度为280～360mg/L，步骤(5)所述高浓度亚硒酸钠培养液的浓度为600～1500mg/L。
3.根据权利要求1所述利用紫外诱变筛选富硒螺旋藻突变株的方法，其特征在于：步骤(2)所述超声破碎功率为5～30W；超声破碎时间为20～80s。
4.根据权利要求3所述利用紫外诱变筛选富硒螺旋藻突变株的方法，其特征在于：步骤(2)所述超声破碎功率优选为20W；超声破碎时间优选为20s。
5.根据权利要求1所述利用紫外诱变筛选富硒螺旋藻突变株的方法，其特征在于：步骤(4)所述紫外光照射时间为20～60s。
6.根据权利要求1所述利用紫外诱变筛选富硒螺旋藻突变株的方法，其特征在于：步骤(4)所述致死率优选采用显微计数法统计。
7.权利要求1～6任一项所述利用紫外诱变筛选富硒螺旋藻突变株的方法制备得到的富硒螺旋藻突变株。
8.权利要求1～6任一项利用紫外诱变筛选方法得到的富硒螺旋藻突变株在制备富硒螺旋藻粉中的应用。
9.一种富硒螺旋藻粉，其特征在于：采用如下方法制备而成：
将权利要求1～6任一项所述方法制得的富硒螺旋藻突变株在28℃、PH＝10、光照强度为40μE·M-2·S-1条件下，利用Zarrouk培养基进行培养；在培养初期加入1000mg/L的Na2SeO3，培养2周，离心收集，冷冻真空干燥，制得所述富硒螺旋藻粉。
10.根据权利要求9所述的富硒螺旋藻粉，其特征在于：所述Zarrouk培养基主要成分包括：13.61g/LNaHCO3，4.03g/L Na2CO3，0.5g/LK2HPO4，1g/LK2SO4，1g/L NaC l，0.2g/LMgSO4·7H2O，2.5g/L NaNO3，0.04g/L CaCl2·2H2O，0.01g/L FeSO4·7H2O，1ml/L微量元素A5溶液。
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