[发明专利]食品和饲料中驴源性成分的实时荧光PCR检测方法

说明书

本发明公开了一种食品和饲料中驴源性成分的实时荧光PCR检测方法，包括以下步骤：第一步，以待测样品的DNA为模板，进行荧光定量PCR扩增，获得PCR扩增产物；第二步，检测扩增产物的荧光信号；第三步，以检测结果的Ct值判定样品中是否含有驴源性成分以及定量检测样品中的驴源性成分的含量；其中，用于PCR扩增的反应体系中含有扩增驴源性成分的特异性引物对和驴源性成分的特异性探针。本发明的驴源性成分的实时荧光PCR扩增的特异性引物对和探针不仅特异性好，而且灵敏度高，为快速准确地检测食品和饲料中是否含有驴源性成分提供了一种定量检测方法，具有较好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体地说，是关于一种食品和饲料中驴源性成分的实时荧光PCR检测方法。

背景技术

肉类产品的种类鉴定和定量在食品安全监测当中具有重要作用，在一些欧洲国家，所有肉类产品均需要明确标注动物源性成分和所占比例，即便如此肉类掺假仍然时有发生。由于肉类纹理相近等因素使得消费者没有办法准确识别肉的种类，也使得不法商贩有了可乘之机，虽然肉类的掺假行为不一定会影响健康，但是却极大的增加了消费者的不信任感。因此，建立一套准确可靠的定性检测方法就显得十分必要，且刻不容缓。

目前国内外检测动物成分的引物和探针一般都是针对线粒体基因设计的，线粒体基因在细胞中的拷贝数在5000-6000拷贝或更多。在实际研究工作中发现，利用多拷贝的线粒体基因设计引物和探针进行检测时，在目标检测物浓度极低的情况下，同样会出现较低的Ct值，使检测人员很难判断实际样品是真正含有目标成分，还是样品受到非常轻微的污染所致。所以利用线粒体基因设计引物和探针进行检测，容易出现假阳性结果或很难判断低目标含量下的检测结果等情况，而检测结果错误会引起很大的贸易纠纷。

因此，有必要建立一套特异性好、灵敏度高、可以避免出现假阳性结果等的食品和饲料中驴源性成分的实时荧光PCR检测方法。

发明内容

本发明首要目的在于提供一种食品和饲料中驴源性成分的实时荧光PCR检测方法，以克服现有技术存在的容易出现假阳性结果等的不足。本发明的第二个目的在于提供一种检测试剂盒以及检测试剂盒的应用。本发明的第三个目的在于提供一种食品和饲料中驴源性成分的实时荧光PCR检测方法的引物对和探针。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

作为本发明的第一个方面，一种食品和饲料中驴源性成分的实时荧光PCR检测方法，该方法包括以下步骤：

第一步，以待测样品的DNA为模板，进行荧光定量PCR扩增，获得PCR扩增产物；

第二步，检测扩增产物的荧光信号；

第三步，以检测结果的Ct值判定样品中是否含有驴源性成分以及定量检测样品中的驴源性成分的含量；

其中，用于PCR扩增的反应体系中含有扩增驴源性成分的特异性引物对和驴源性成分的特异性探针，所述扩增驴源性成分的特异性引物对的序列如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示，所述驴源性成分的特异性探针的序列如SEQ ID NO.3所示。

根据本发明，所述PCR扩增的条件如下：

反应体系为25μL：PCR酶混合物12.5μL，引物各10μM 1μL，探针10μM 0.5μL，DNA模板5μL，PCR级水5μL；

PCR反应条件：95℃10min；95℃15s，60℃60s；共45个循环。

作为本发明的第二个方面，一种驴源性成分的检测试剂盒，该检测试剂盒含有以下试剂：

(a)扩增驴源性成分的特异性引物对；

(b)驴源性成分的特异性探针；