[发明专利]人型支原体的LAMP检测方法及试剂盒

说明书

本发明的一种人型支原体的LAMP检测方法及试剂盒，针对针人型支原体的gap genes基因序列基因的6或8个区域设计4或6条特异引物，通过发明人的创造性劳动设计得到LAMP检测引物组，用于检测样本中的人型支原体，具有快速准确、简单价廉且重复性、特异性好，且灵敏度高的特点，检测线达到42pg/μL。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种人型支原体的LAMP检测方法及试剂盒。

背景技术

支原体中的人型支原体(Mycoplasma hominis,Mh)、解脲脲原体(Ureaplasmaurealyticum,Uu)和生殖器支原体(Mycoplasma genitalium,Mg)均能够导致实验室细胞污染，或引起人类疾病，例如：泌尿生殖道感染支原体感染、盆腔炎症等。

目前常用的人型支原体实验室检测方法有：形态学检查、支原体培养、抗原检测、血清学方法等。采用液体培养法和固体培养法检测人型支原体，液体培养法主要依靠人型支原体分解尿素产生碱性的NH₃，但液体培养基不能准确判断有无人型支原体感染，存有一定的假阳性率；同时不能做到纯分离，且一种液体培养基不能同时判断两种以上支原体感染，而且这两种传统的检测方法耗时长。

因此，有必要提供一种快速、高灵敏度、高特异性、重复性好的检测人型支原体的方法。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供一种人型支原体的LAMP检测方法及试剂盒，以实现快速准确地检测人型支原体。

具体技术方案如下：

一种人型支原体的LAMP检测引物组，所述检测引物组包括：

上游外引物F3：核苷酸序列为SEQ ID NO.7；

下游外引物B3：核苷酸序列为SEQ ID NO.8；

上游内引物FIP：核苷酸序列为SEQ ID NO.9；

下游内引物BIP：核苷酸序列为SEQ ID NO.10；

上游环引物LoopF：核苷酸序列为SEQ ID NO.11；

下游环引物LoopB：核苷酸序列为SEQ ID NO.12。

本发明还提供了一种人型支原体的LAMP检测试剂盒，具体技术方案如下：

一种人型支原体的LAMP检测试剂盒，其包含有如上所述的LAMP检测引物组。

本发明还提供了一种非诊断目的的人型支原体的LAMP检测方法，包括以下步骤：

(1)提取待测样品的DNA；

(2)以待测样品的DNA为模板，以如上所述的LAMP检测引物组为引物，进行实时荧光LAMP反应。

基于上述技术方案，本发明具有以下效果：

本发明针对人型支原体的gap gene作为靶序列，通过发明人的创造性劳动设计得到LAMP检测引物组，用于检测样本中的人型支原体，具有快速准确、简单价廉且重复性、特异性好，且灵敏度高的特点，检测线达到5.8pg/μL。

将本发明的LAMP检测引物组用于检测人型支原体，该技术针对靶基因的6或8个区域设计4或6条特异引物，增强了反应的特异性；不需要模板的热变性、长时间温度循环，利用一种链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)在等温条件下就能完成反应，缩短了检测时间；扩增产物呈特征性梯状条带，加入荧光染料，观察反应液的颜色变化，直接用肉眼判读结果，不需要繁琐的电泳和紫外观察等过程，操作简单、方便；特别是它不需使用昂贵的热循环仪，凝胶电泳和紫外检测等设备，成本较低；适合于病原微生物的现场快速检测、战时野外及基层普及应用。