[发明专利]一种自动合成多肽分子内二硫键的方法

说明书

本发明公开了一种自动合成多肽分子内二硫键的方法，包括以下步骤：（a）预先利用多肽固相合成技术获得含有目标多肽的肽树脂，其中，所述目标多肽的巯基应用Mmt保护基保护；（b）将肽树脂置于多肽固相合成仪中，加入含有1vol%三氟乙酸的二氯甲烷溶液，反应30~200 min，以脱去巯基的Mmt保护基；（c）步骤（b）之后，加入DMF和[Pt(phen)(en)Cl₂]Cl₂溶液，反应2~4h；（d）将步骤（c）所得产物干燥后，在多肽自动切割仪上切割多肽，然后在得到的切割液中加入乙醚，经沉淀、过滤后，得到含有分子内二硫键的目标多肽。本发明所涉及的合成步骤基本都能在多肽固相合成仪和切割仪上自动进行，同时配合[Pt(phen)(en)Cl₂]Cl₂的使用，大大提高了多肽的合成效率和合成产率。

技术领域

本发明涉及一种合成多肽分子内二硫键的方法，具体的说是一种自动合成多肽分子内二硫键的方法。

背景技术

多肽分子内二硫键可以维持多肽的二维结构，提高多肽的药物活性，选择性以及抗水解性能。目前，含有分子内二硫键的多肽类药物如催化素，加压素，生长抑素等已经在临床上用于各种疾病的治疗。同时，大量的含分子内二硫键的、具有药物和生理活性的多肽处于各阶段的临床研究中。因此，合成多肽分子内二硫键是此类多肽药物合成的重要步骤。

多肽类药物分子内二硫键的合成是精细有机化工及药物化学中的一个重要反应。通常在溶液中均相氧化含有巯基基团的多肽是合成多肽分子内二硫键的主要方法。合成步骤包括：（1）利用固相多肽合成法合成含有Trt保护巯基的多肽；（2）利用切割试剂把多肽从树枝上切割下来，同时脱掉巯基的Trt保护基，得到含有巯基的多肽溶液；（3）在切割液中加入冰乙醚，使含巯基的多肽沉淀；（4）过滤，得到固体的含有巯基的多肽；（5）把得到的含有巯基的多肽溶解于适当的溶剂中，加入氧化剂氧化多肽中的巯基，得到多肽分子内二硫键；（6）色谱分离去除氧化剂及其产物，得到含有分子内二硫键的多肽溶液；（7）冻干，得到固体的含有分子内二硫键的多肽粉末。上述合成过程中，固相合成含有Trt保护巯基的肽树脂在多肽固相合成仪上自动完成，多肽的切割在自动切割仪上完成，其它步骤则需要大量的人力操作才能进行。因此，目前合成含有多肽分子内二硫键的多肽的合成步骤繁琐，大大限制了多肽分子内二硫键合成的原子经济性。

因此，如果能开发一种自动化程度较高的多肽分子内二硫键的合成方法，则能大大降低使用该类氧化剂来合成药物分子内二硫键的成本支出，提高合成反应的原子经济性。

发明内容

本发明的目的是提供一种自动合成多肽分子内二硫键的方法，以解决现有多肽分子内二硫键合成产率低、原子经济性差的问题。

本发明的目的是这样实现的：

一种自动合成多肽分子内二硫键的方法，包括以下步骤：

（a）预先利用多肽固相合成技术获得含有目标多肽的肽树脂，其中，所述目标多肽的巯基应用Mmt保护基保护；

（b）将肽树脂置于多肽固相合成仪中，加入含有1vol%三氟乙酸的二氯甲烷溶液，反应30~200 min，以脱去巯基的Mmt保护基，反应结束后，分别用二氯甲烷和DMF进行洗涤；

（c）步骤（b）之后，加入DMF和[Pt(phen)(en)Cl₂]Cl₂溶液，反应2~4h，反应结束后，依次用体积比为1~5∶1的DMF/H₂O、DMF和乙醚溶液进行洗涤；

（d）将步骤（c）所得产物干燥后，在多肽自动切割仪上切割多肽，然后在得到的切割液中加入乙醚，经沉淀、过滤后，得到含有分子内二硫键的目标多肽。