[发明专利]一种三白草药材的HPLC指纹图谱的建立方法

权利要求书

1.一种三白草药材的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，该建立方法包括以下步骤：

步骤1，供试品溶液的制备：取三白草样品粉末，加入80%甲醇，经回流提取后，用80%甲醇补足减失的质量，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；

步骤2，指纹图谱的建立：采用高效液相色谱仪，对供试品溶液进行检测，建立供试品溶液的指纹图谱；

在步骤2中，色谱条件为：采用Waters Xbridge^TM C₁₈色谱柱，色谱柱规格为4. 6mm x250mm、5µm，以甲醇为流动相A，水为流动相B，梯度洗脱，柱温为25℃，流速为1.0 mL·min^-1，检测波长为238nm，进样量为10μL；

梯度洗脱条件：0~21min，14%A；21~37min，14~39%A；37~42min，40~52%A；42~96min，52~80%A；96~105min，80~95%A；

该建立方法还包括步骤3，指纹图谱的相似度评价：将供试品溶液的指纹图谱与标准指纹图谱进行比对，计算相似度；

标准指纹图谱的建立是以金丝桃苷、芦丁、槲皮苷、马兜铃内酰胺AⅡ、1’表-三白草酮、(-)-三白草醇甲基醚、三白草酮、三白草醇I、里卡灵A、4-O-去甲基马钠萨亭B、马钠萨亭B、里卡灵B的混合物为对照品溶液测得。

2.根据权利要求1所述的三白草药材的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，在步骤1中，三白草样品粉末与甲醇的比例为1g三白草样品粉末：50mL 80%甲醇。

3.根据权利要求1所述的三白草药材的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，在步骤1中，回流提取时间为30min，且采用0.45μm微孔滤膜过滤。

4.根据权利要求1-3任一 所述的三白草药材的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，对照品溶液为金丝桃苷35.46μg/mL、芦丁21.54μg/mL、槲皮苷41.36μg/mL、马兜铃内酰胺AⅡ 45.67μg/mL、1’表-三白草酮49.28μg/mL、(-)-三白草醇甲基醚67.58μg/mL、三白草酮179.04μg/mL、三白草醇I 52.80μg/mL、里卡灵A 80.67μg/mL、4-O-去甲基马钠萨亭B80.48μg/mL、马钠萨亭B 122.08μg/mL、里卡灵B 67.04μg/mL的混合对照品甲醇溶液。

5.根据权利要求4所述的三白草药材的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，供试品溶液的指纹图谱共有模式具有12个共有特征峰，各共有特征峰对应的化学成分分别是1号峰：芦丁，2号峰：金丝桃苷，3号峰：槲皮苷，6号峰：马兜铃内酰胺AⅡ，10号峰：1’表-三白草酮，13号峰：(-)-三白草醇甲基醚，14号峰：三白草酮，15号峰：三白草醇I，17号峰：里卡灵A，18号峰：4-O-去甲基马钠萨亭B，19号峰：马钠萨亭B，20号峰：里卡灵B。

6.根据权利要求5所述的三白草药材的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，以3号峰槲皮苷色谱峰的保留时间和峰面积为参照，得出如下其他峰的相对保留时间和相对峰面积：

1号峰：相对保留时间为0.83-0.849，相对峰面积为0.022-1.002；

2号峰：相对保留时间为0.859-0.866，相对峰面积为0.583-1.58；

6号峰：相对保留时间为1.807-1.844，相对峰面积为0.123-0.653；

10号峰：相对保留时间为2.292-2.339，相对峰面积为0.114-0.404；

13号峰：相对保留时间为2.456-2.542，相对峰面积为0.059-0.356；

14号峰：相对保留时间为2.527-2.582，相对峰面积为2.389-8.322；

15号峰：相对保留时间为2.624-2.682，相对峰面积为0.137-0.705；

17号峰：相对保留时间为2.729-2.79，相对峰面积为0.19-2.268；

18号峰：相对保留时间为2.84-2.903，相对峰面积为0.201-0.747；

19号峰：相对保留时间为3.003-3.072，相对峰面积为0.352-1.155；

20号峰：相对保留时间为3.13-3.204，相对峰面积为0.07-1.032。