[发明专利]肝癌AFP特异性人工抗原递呈细胞诱导试剂盒

说明书

本发明公开了一种肝癌AFP特异性人工抗原递呈细胞诱导试剂盒，属于细胞生物学技术领域，解决现有技术DC细胞体外扩增困难、体外刺激CD8+T细胞获得特异性CTL细胞效率低的问题。试剂盒包括HLA‑A2‑Ig二聚体、anti‑CD28mAb抗体、磁珠和AFP多肽等。本发明的试剂盒能够有效地体外扩增抗原特异性CTL细胞，且特异性能够维持数月，针对肝癌的特异性aAPC进行CD8+T细胞刺激，经过一周的培养CTL占总细胞量的95％以上，扩增倍数在1000倍之上。经过aAPC反复刺激AFP特异性CTL细胞数量可以继续扩增。获得的CTL细胞在表型上表现为效应记忆细胞特性，并且能够分泌TNFα和IFNγ。

技术领域

本发明涉及细胞生物学技术领域，尤其涉及一种肝癌AFP特异性人工抗原递呈细胞诱导试剂盒。

背景技术

抗原特异性T淋巴细胞(antigen-specific T cells，AST)是介导适应性免疫应答的核心细胞，其数量的多寡和功能的强弱直接反映了人体持异性细胞免疫的功能状态。检测抗原特异性T细胞的数量及其反应活性在感染、肿瘤、自身免疫病、移植排斥等疾病的发病机制研究和个体化临床治巧方面都有重要意义。

机体抗原特异性免疫功能的激活需要抗原呈递细胞(antigen presenting cell,APC)将特异性病源信号传递给T细胞，产生抗原特异性T淋巴细胞。人体内抗原呈递细胞有三种包括树突状细胞(dentritic cell,DC)、巨噬细胞和B细胞，其中树突状细胞是最强的抗原呈递细胞。人体受到外界病原体入侵时，树突细胞识别并吞噬病原体，从身体各个部位迁移到淋巴器官，通过主要组织相容性复合体(the major histocompatibility complex，MHC)将抗原呈递于细胞表面，MHC分子与T细胞表面受体(T cell receptor，TCR)相结合，形成免疫突触。MHC分子呈递抗原是DC激活原初T细胞的第一个信号，不同的MHC分子结合不同TCR，MHC I型分子特异性结合CD8分子激活细胞毒性T细胞(cytokine T cell，CTL)，MHC II型分子特异性结合CD4分子激活辅助性T细胞(helper T cell，Th)。第二个信号是DC与T细胞产生的CD80、CD86等协同刺激分子(co-stimulatory molecules)，刺激分子与TCR-CD28结合是原初T细胞活化的必要条件。MHC分子呈递抗原和协同刺激能够刺激T细胞增殖，但是细胞繁殖能力和细胞毒性较弱，T细胞效应器功能(effector function)丧失，进入免疫耐受状态。体外实验发现，成熟DC释放的IL-12，INF-γ等细胞因子(cytokines)能够增强CTL的细胞毒性，增加辅助性T细胞分泌IFN-γ，阻止T细胞进入免疫耐受状态，这些细胞因子被认为是活化原初T细胞的第三种信号。受到病原体刺激的成熟DC细胞能够激活T细胞和B细胞。

CTL在识别胞内感染、癌变方面发挥重要作用。但人体内会存在一些免疫抑制性的微环境，这时的抗原呈递细胞受到病原体刺激但未能成功表达共刺激分子，使抗原特异性CTL细胞进入免疫耐受状态。免疫耐受状态时人体自身的抗原呈递细胞不工作，不能进行有效的抗原呈递，使机体对某一病原体处于不识别状态。以CTL为基础的获得性免疫细胞疗法为治疗癌症和一些病毒感染疾病提供了一种有效的治疗方法，虽然这种方法还在试验阶段，但是为治疗癌症等疾病带来了极大希望。

体外刺激生成、扩增CTL细胞的方法多样，但现有诱导CTL手段成本较高，对技术要求较高。其中最为常用的方法是利用自体树突状细胞作为抗原呈递细胞获得特异性CTL细胞，这种方法需要患者提供大量的白细胞，并且实验室中培养诱导DC细胞是非常昂贵的，体外扩增DC细胞目前是一项技术难题。更关键的是，体外DC诱导的CTL细胞特异性低，CTL特异性杀伤活性低。由于DC细胞体外扩增困难、体外刺激CD8+T细胞获得特异性CTL细胞效率低，因此获得大量的、高效呈递抗原的抗原呈递细胞成为技术突破点，通过改造K562细胞、抗体修饰磁珠等方法获得人工抗原呈递细胞(artificial antigen presenting cell,aAPC)。