[发明专利]PD-1的纳米抗体及其临床应用

说明书

本发明公开了一种PD‑1的纳米抗体的VHH链，包括框架区FR和互补决定区CDR，公开了框架区FR选自下组的FR的氨基酸序列和互补决定区CDR氨基酸序列，本发明还公开了一种PD‑1纳米抗体，还公开了一种DNA分子，它编码本发明所述的PD‑1的纳米抗体的VHH链或本发明所述的PD‑1纳米抗体，还公开了一种宿主细胞，它可以表达PD‑1的纳米抗体，还公开了该PD‑1纳米抗体用于检测PD‑1的用途。通过本发明所公布的纳米抗体基因序列及宿主细胞，该纳米抗体能够在大肠杆菌内高效表达，应用于PD‑1检测试剂及生物制药的研发。

技术领域

本发明属于生物医学或生物制药技术领域，涉及针对于PD-1的纳米抗体及其编码序列。

背景技术

生物学家Ward在1989年分离检测骆驼血清中抗体时发现，骆驼血液中除了常规的四链抗体外，还有一些仅含重链的抗体。1993年，科学家Hamers-Casterman等研究表明，骆驼抗体天然缺失轻链，只含有重链，因此又称为重链抗体(heavy chain antibodies，HCAbs)。另有研究者发现，骆驼抗体中还缺少CH1。克隆重链抗体的可变区得到只由一个重链可变区组成的单域抗体，称为VHH抗体(Variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody，VHH)。VHH晶体直径2.5nm，长4nm，因此又称为纳米抗体 (nanobody，Nb)，是自然存在的可与抗原结合的最小片段。纳米粒子具有的颗粒尺寸小、比表面积大、表面能高等特点，以及表面效应、尺寸效应和宏观量子隧道效应使得纳米抗体在诸多方面均优于传统抗体。纳米抗体在疾病的检测和治疗方面具有显著的应用成果。

程序性细胞死亡蛋白-1(programmed death-1，PD-1)是一种共刺激分子，属于CD28 家族，呈诱导性表达于活化的T细胞、B细胞和NK细胞表面，与其配体作用传递抑制性信号，发挥负向调控作用，这一信号在自身免疫性疾病、肿瘤发生、慢病毒感染中具有重要的生物学意义。PD-1通过与程序性细胞死亡因子配体1或者2结合后，招募并激活蛋白络氨酸磷酸酶等激活信号通路，对T细胞免疫起到负向调节的功能。PD-1还可以通过抑制辅助性T细胞间接影响体液免疫或者直接通过与B细胞上的PD-1结合影响抗体分泌。PD-1信号异常可以引起体内免疫微环境失去稳态，导致自身免疫性疾病或者肿瘤发生。因此利用抗PD-1的纳米抗体封闭PD-1信号通路，可以减弱对活化的T 细胞抑制作用，从而增强抗肿瘤的功能。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供一种针对PD-1的纳米抗体，同时提供该纳米抗体的编码序列及该纳米抗体在制备检测的应用。

技术方案：本发明的技术方案为：

本发明的第一方面，提供了一种针对PD-1重链抗体VHH，包括框架区FR和互补决定区CDR，所述框架区FR选自下组的FR的氨基酸序列：SEQIDNO：1所示的FR1，SEQIDNO：2所示的FR2，SEQIDNO：3所示的FR3，SEQIDNO：4所示的FR4。

所述互补决定区CDR选自下组的CDR的氨基酸序列：SEQIDNO：5所示的CDR1，SEQIDNO：6所示的CDR2，SEQIDNO：7所示的CDR3。

优选地，所述的PD-1纳米抗体的VHH链，它具有SEQIDNO：8所示的氨基酸序列。

本发明第二方面，一种针对PD-1重链抗体VHH，此抗体特异性识别PD-1抗原，包括一条具有SEQIDNO：8所示氨基酸序列的VHH链。

本发明第三方面，提供了一种DNA分子，它编码选自下组的蛋白质：本发明所述的PD-1重链抗体VHH。

优选地，所述的DNA分子，其特征在于，它具有选自下组的DNA序列：SEQIDNO：9。