[发明专利]含有RNA结合蛋白的融合蛋白及其配合使用的表达载体

权利要求书

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白具有式Ia或式Ib结构：

A-B-C(Ia)

C-B-A(Ib)；

式中，

A为翻译起始因子元件eIF3a；

B为无或连接肽；

C为RNA结合蛋白元件MS2衣壳蛋白或Qβ衣壳蛋白；

各“-”为肽键。

2.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸编码权利要求1所述的融合蛋白。

3.一种载体或载体组合，其特征在于，所述的载体或载体组合含有权利要求2所述的多核苷酸。

4.一种基因工程细胞，其特征在于，所述基因工程细胞的基因组的一个或多个位点整合有权利要求2所述的多核苷酸，或者所述基因工程细胞中含有权利要求3所述的载体或载体组合。

5.一种由权利要求4所述基因工程细胞获得的细胞提取物或细胞裂解液，其特征在于，所述细胞提取物或细胞裂解液包含权利要求1所述融合蛋白。

6.一种与权利要求1所述的融合蛋白配合使用的表达载体，其特征在于所述表达载体至少包含：模板DNA序列，所述RNA结合蛋白元件的特异性识别结合位点序列。

7.根据权利要求6所述的表达载体，其特征在于：所述表达载体还包括选自下组的一种或多种元件：启动子元件、增强子元件、烟草花叶病毒的5’端前导序列、Kozak序列、多聚腺苷酸、终止子元件。

8.一种体外无细胞蛋白合成体系，所述合成体系至少包括权利要求7所述的细胞提取物或细胞裂解液和权利要求6或7所述的表达载体。

9.根据权利要求8所述的合成体系，其特征在于：所述合成体系还包括选自下组的一种或多种组分：用于合成RNA的底物，用于合成蛋白的底物，聚乙二醇，镁离子，钾离子，缓冲剂，RNA聚合酶，能量再生系统，二硫苏糖醇，任选的水性溶剂。

10.一种合成外源蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(i)构建含有外源蛋白模板DNA序列的权利要求6或7所述的表达载体；

(ii)提供权利要求8或9所述的体外无细胞蛋白合成体系，进行孵育反应，合成所述的外源蛋白；

以及可选的步骤(iii)分离或检测所述外源蛋白。

11.一种试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括容器以及分别位于所述容器中的权利要求8或9所述的体外无细胞蛋白合成体系中的各组分。