[发明专利]人造的禽副黏病毒

说明书

本发明属于生物医药领域。它描述了一类人造的禽副黏病毒。该人造病毒的基因组含有骨架序列（是某个禽副黏病毒的基因组序列）和流感病毒血凝素基因的部分序列（此部分序列不编码锚定到病毒囊膜的多肽）。与既往类似的人造禽副黏病毒不同，该人造禽副黏病毒不改变其囊膜结构。因此，这类人造病毒如果用作人与动物的流感疫苗（是活疫苗）毒株，能在病毒囊膜结构方面，保证这类人造病毒在被接种的动物体内正常增殖，从而保证其免疫效果。这类人造病毒的基因组除了插入流感病毒基因部分序列，还可以插入另一类别的病毒的某个蛋白质编码序列，从而使得被接种这类人造病毒的动物，针对另一类别的病毒，也产生特异性的免疫应答反应。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，涉及人造的动物病毒，可以用作人或动物的流感疫苗毒株。

背景技术

在本发明申报前，用于人或动物流感疫苗的毒株分为自然的病毒（即非人造的病毒）、以自然的病毒为实物基础进行改造的病毒、不以自然的病毒为实物基础而制备的人造的病毒。其中，人造的病毒包括人造的禽流感病毒、人造的禽副黏病毒、人造的其他病毒。人造的禽流感病毒和人造的禽副黏病毒都已经用于中国H5亚型禽流感的防控。其中，人造的禽副黏病毒是作为家禽使用的活疫苗，用来预防H5亚型禽流感。这类活疫苗在被接种的动物体内增殖，从而诱导动物体内发生免疫应答反应。

在本发明申报前，人造禽副黏病毒技术（称为副黏病毒反向遗传操作技术）已经成熟，并广泛用于副黏病毒的基础研究和多种病毒性传染病的疫苗研究。因此，许多实验室不以自然的病毒为实物基础，不依赖于任何遗传资源，按照本说明书，都能够制造相应的禽副黏病毒。

人造的禽副黏病毒基因组含有骨架序列和外源基因序列。其骨架序列与各类自然的病毒的基因组的序列进行比对，与禽副黏病毒的基因组序列最为相似；换言之，本发明所述的人造的病毒的基因组是以禽副黏病毒基因组为骨架的。

禽副黏病毒（avian paramyxovirus）是副黏病毒科（Paramyxoviridae）禽腮腺炎病毒属（Avulavirus）内各种病毒的总称。迄今，人类已经发现十余个型的禽副黏病毒，每型对应一种病毒。1型禽副黏病毒（avian paramyxovirus1或avian avulavirus 1）又称为新城疫病毒（Newcastle disease virus）。

迄今，人造的用作流感疫苗毒株的禽副黏病毒中，有些以1型禽副黏病毒基因组为基因组骨架的，有些以其他型的禽副黏病毒基因组为基因组骨架的。不以1型禽副黏病毒（新城疫病毒）的基因组为骨架，而以其他型的禽副黏病毒的基因组为骨架，插入流感病毒血凝素（hemagglutinin，HA）基因，而制造的禽副黏病毒，作为流感疫苗毒株，能够避免家禽体内针对1型禽副黏病毒（新城疫病毒）的母源抗体的抑制作用。

流感病毒HA基因包括编码区和非编码区，其完整的编码区包括四个部分：信号肽编码序列、HA1序列（编码HA1蛋白）、裂解位点序列、HA2序列（编码HA2蛋白）。宿主体内产生的针对流感病毒的保护性抗体大多数是结合到HA1蛋白。HA2蛋白的末端含有一段能够锚定到病毒囊膜的多肽。

禽副黏病毒的基因组是单链负股RNA，依次含有N基因、P基因、M基因、F基因、HN基因和L基因，它们依次编码N蛋白、P蛋白、M蛋白、F蛋白、HN蛋白和L蛋白。在本发明申报前，用作流感疫苗毒株的人造的禽副黏病毒都是在禽副黏病毒的基因组中，插入流感病毒完整的HA基因编码区。这个完整的HA基因编码区编码了锚定到病毒囊膜的一段多肽（即HA2蛋白末端一段多肽），因此该人造的禽副黏病毒所产生的HA蛋白能够锚定到病毒的囊膜上，从而改变禽副黏病毒的囊膜结构（自然的禽副黏病毒的囊膜上没有流感病毒的HA蛋白）。这种改变有可能会抑制该病毒的增殖。因此，如果这类人造病毒作为疫苗（指活疫苗）毒株，则该病毒可能在被接种的动物体内的增殖受到抑制，从而可能降低疫苗的免疫效果。