[发明专利]一种批量制备人工诱导雌核发育石斑鱼的方法

说明书

本发明公开了一种批量制备人工诱导雌核发育石斑鱼的方法，将批量紫外照射处理的鞍带石斑鱼稀释精液作为刺激源，与棕点石斑鱼卵子进行授精；激活后7分钟转入预先装有(4℃±0.5℃)海水的冷休克处理箱中，低温休克处理10分钟，使用多个冷休克处理箱可实现更大量的卵子休克处理；进行复温至常温处理，然后经孵化桶孵化；制备过程中使用对照组倍性分析数据对获得的胚胎进行检测，实现质量控制。通过本发明的方法，能够实现批量高效制备雌核发育石斑鱼纯系群体，为培育优良石斑鱼品种奠定基础。

技术领域

本发明属于鱼类遗传育种领域，涉及一种海水鱼类的培养方法及应用，具体涉及批量制备人工诱导雌核发育石斑鱼的方法。

背景技术

石斑鱼(Epinephalus)是世界性名贵暖水性礁栖鱼类，同时也是海水养殖中的重要名贵物种。其营养丰富，肉质鲜美，具有较高的食用和观赏价值，是我国华南沿海地区重要的海水养殖种类。拥有巨大的市场潜力，深受广大消费者青睐。

石斑鱼养殖产业虽得到很大发展，但也面临着品系选育周期长、育苗成活率低、病害严重、个体大小参差不齐、优良品种的缺乏等亟待解决的问题。选育出优良纯系或品系是石斑鱼良种培育的必由之路。作为一种先雌后雄的性反转大型鱼类，石斑鱼性成熟时间长，个体发育为成熟雌性的时间长达3～5年，家系育种等手段耗时非常长，而1代雌核发育产生相当于7～8代自交选育的纯合效果，能够大大缩短品系选育的周期，因此采用雌核发育技术手段将显著提高石斑鱼良种培育效率。

尽管人工诱导雌核发育在其他鱼类育种上得到了很好的应用，但由于石斑鱼育苗成活率低，由受精卵培育为幼苗的成活率通常小于5％，幼苗培育成成鱼的成活率约为30％，常规的人工雌核发育技术得到的数千数万的鱼卵数量无法满足石斑鱼育苗和育种的要求。因此批量制备人工诱导雌核发育的方法能够快速高效地得到批量雌核发育鱼卵，达到百万数量级，解决了育苗的鱼卵数量问题，使得石斑鱼雌核发育育种成为可能，对推动石斑鱼优良品种的选育具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供了一种批量制备人工诱导雌核发育石斑鱼的方法，该方法实现批量高效制备雌核发育石斑鱼纯系群体，为培育优良石斑鱼品种奠定基础。

为了实现上述目的，本发明的技术方案为：提供一种批量制备人工诱导雌核发育石斑鱼的方法，包括如下步骤：

(1)石斑鱼精子遗传物质批量灭活处理

a、雄鱼的选择和精子的采集：选择体格健壮、体重为60～80kg/尾的鞍带石斑鱼雄性成鱼为亲本，置于海上网箱或陆地池塘进行培育，投喂冰鲜杂鱼和鱿鱼进行培育；待海水平均温度稳定在28～32℃时，采用麻醉剂将其麻醉后捞出水面置于帆布担架内挤精；得到鞍带石斑鱼鲜精后，使用精子稀释液按照1:8～10比例稀释，0～4℃冷藏保存；

b、精子遗传物质批量灭活：将8个培养皿同时铺上稀释过的鞍带石斑鱼精液，精子液面厚度控制在0.25～0.35mm，置于紫外灯箱中照射；每个紫外灯箱一次可照射灭活16ml稀释精液，每次照射时间为4分钟，1小时一个紫外灯箱可灭活大约240ml稀释精液；多次处理可实现大批量灭活精子遗传物质；照射过程中遮蔽自然光并置于摇床中进行，保持60～80rpm摇动速度以确保精子照射均匀，紫外光照射剂量为40～60mJ/cm²，照射后快速将照射液转入收集管进行收集，于0～4℃冷藏避光保存，以备用；

c、人工授精的方法：鞍带石斑鱼精子紫外照射处理完成后，收集精子置于冰上避光保存；将待产棕点石斑鱼雌鱼捞出，擦干体表水分，将成熟卵子挤入干燥刻度烧杯中；按照1ml处理精子授精10ml卵子的比例进行精卵人工混合，混合后加入洁净自然海水搅拌30秒，完成人工授精；

(2)批量冷休克诱导石斑鱼卵子