[发明专利]菵草CYP704B1基因的应用有效
| 申请号： | 201910205754.3 | 申请日： | 2019-03-18 |
| 公开（公告）号： | CN109837355B | 公开（公告）日： | 2020-10-02 |
| 发明（设计）人： | 崔海兰;李香菊;王京京;陈景超;李政;黄兆峰;于惠林 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;黄爽 |
| 地址： | 100091 北京市海淀区圆*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 菵草 cyp704b1 基因 应用 | ||
1.菵草CYP704B1基因的以下任一应用：
1）在鉴定不同菵草材料对磺酰脲类除草剂抗性中的应用；
2）作为不同菵草材料对磺酰脲类除草剂抗性的标志物中的应用；
其中，所述菵草CYP704B1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；
所述磺酰脲类除草剂为甲基二磺隆。
2.鉴定不同菵草材料对磺酰脲类除草剂抗性的方法，其特征在于，所述方法包括根据CYP704B1基因的相对表达量来鉴定不同菵草材料对磺酰脲类除草剂的抗性；
其中，所述菵草CYP704B1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；
所述磺酰脲类除草剂为甲基二磺隆。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法包括：提取待测菵草总RNA，反转录为cDNA；然后，利用引物CYP704B1-F1和CYP704B1-R1，以cDNA为模板，进行实时荧光定量PCR扩增；同时设置内参基因，计算CYP704B1基因的相对表达量；
其中，引物CYP704B1-F1和CYP704B1-R1的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:2和3所示。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述内参基因选自UBQ、CAP及GADPH中的至少一个，用于扩增各内参基因的引物分别如下：
UBQ-F：5ˊ-CAAGAAGAAGACGTACACCAAG-3ˊ
UBQ-R: 5ˊ-GACCTTGTAGAACTGGAGGAG-3ˊ；
CAP-F:5ˊ-AAGCCCCAATCAAAATCAACACGAA-3ˊ
CAP-R: 5ˊ-AAGAACACCAAGACCCCCTGC-3ˊ；
GADPH-F：5ˊ-AGGTTATCAATGACAAGTTTGG-3ˊ
GADPH-R：5ˊ-ATCAACAGTCTTCTGGGTAGC-3ˊ。
5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，PCR反应体系和反应程序如下：
PCR反应体系：2.5 mM dNTP混合液2 μL，10×PCR Buffer 2.5 μL，10 µM上、下游引物各0.5 μL，5 U/µL Taq DNA聚合酶0.5 μL，cDNA 1 μL，加ddH2O至25 μL；
PCR反应程序：94℃预变性5min；94℃变性30s、60℃退火30s、72℃延伸30s，共35个循环；72℃延伸5min。
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