[发明专利]一种对石生金钗石斛和树生金钗石斛进行色谱鉴别的方法

说明书

本方案公开了药材的鉴别技术领域中一种对石生金钗石斛和树生金钗石斛进行色谱鉴别的方法，本方案中首先制备浓度为0.01g/ml的石斛碱标准溶液；再用甲醇超声提取，超声时间为30～60min，超声功率80～100W，频率40～60kHz；离心过滤得到样品液；采用四极杆‑静电场轨道阱高分辨石斛碱标准溶液和样品液的质谱色谱。本方案采用四极杆‑静电场轨道阱高分辨质谱色谱技术为金钗石斛化学成分的分析和质量控制体系的建立，提供了一种快速有效的方法。以检出的八种特征性金钗石斛生物碱成分为指标，综合评价，建立系统的质控方法，便能够快速、灵敏、准确的对比出未知品质的金钗石斛的品质优劣。

技术领域

本发明涉及药材的鉴别技术领域，具体涉及一种对石生金钗石斛和树生金钗石斛进行色谱鉴别的方法。

背景技术

金钗石斛(Dendrobium nobile Lindl.)是我国传统名贵药用植物，早在《神农本草经》中就列为上品，被誉为“九大仙草”之一。药用部分是新鲜或干燥茎，具有强阴益精、厚肠胃、轻身延年的功效。现代药理学研究表明，金钗石斛的主要有效成分为生物碱类和多糖类化合物，具有抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、增强免疫、调节胃肠运动、降血糖、降血脂等多重功效。

由于金钗石斛的药用价值高，需求量的日益增加导致野生金钗石斛的资源已经越来越少，现今，人工栽培的金钗石斛已经占市场的90％以上。然而，金钗石斛的品种很多，临床上常使用药用价值更高的石生金钗石斛。然而，金钗石斛的种植地范围广，种植方式多样，种植年限不一样，药材来源十分混乱，导致市场上的石斛品质不一，质量难以保障，且树生金钗石斛是比较容易种植和常见的一种金钗石斛，再者树生金钗石斛和石生金钗石斛从外观形态比较难以分辨，由此便导致市场上普遍存在一树生金钗石斛冒充石生金钗石斛进行销售的情况，然而树生金钗石斛的药用价值远不如石生金钗石斛。

再加上金钗石斛中化学成分多样，主要含有生物碱类、多糖类、黄酮类、酚类、倍半萜类、香豆素类及甾体糖苷类化合物等，现有的鉴别及质量控制方法，如生药学鉴定法，薄层色谱法，HPLC指纹图谱法等，不能很好的对所含化合物类别相近，但具体药用成分不同的石生金钗石斛和树生金钗石斛进行有效的质量区分。

现在的检测方法选用指标单一，如生物碱类成分、或黄酮类、多糖类等，或以总碱、总多糖进行质量评价，这些都是对某一类别的化合物质进行总的检测分析，难以对石生金钗石斛和树生金钗石斛进行区分。然而药物的药的药用成分通常是其中的某个具体成分，而不是某类成分，若能对具体成分的含量高低进行评价，将能够很好的区分出金钗石斛的种类和品质。但是，目前的金钗石斛鉴别技术中，没有就其药用成分，同时也是金钗石斛的特征性成分——倍半萜类生物碱进行独立分析来辨别金钗石斛品质的技术。

发明内容

本发明意在提供一种对石生金钗石斛和树生金钗石斛进行色谱鉴别的方法，以解决现有鉴别技术只能对成分类别进行总的检测分析，导致精准性不高，难以分别金钗石斛品质的技术问题。

本方案中的一种金钗石斛的色谱鉴别方法，包括以下步骤：

步骤一、浓度为0.01g/ml的石斛碱标准溶液的制备：精密称取石斛碱对照品于量瓶中，加入乙腈溶解，定容至刻度；

步骤二、干燥、粉碎：将金钗石斛样品干燥后进行粉碎，粉碎后筛取过300目筛的金钗石斛细粉；

步骤三、超声提取：将粉碎后的金钗石斛细粉装入锥形瓶中，向锥形瓶中注入甲醇；金钗石斛细粉与甲醇的重量比例为1：100；然后将装有金钗石斛细粉和甲醇的锥形瓶放入超声机中进行超声提取，超声时间为30～60min，超声功率80～100W，频率40～60kHz；

步骤四、离心、过滤：步骤二中超声结束后金钗石斛甲醇溶液冷却至室温，使用甲醇补足超声前后质量差异，再于转速为1200～1500rpm离心10～15min；取出上清液，将上清液通过0.22μm的滤膜进行过滤，过滤液为样品液；