[发明专利]小麦基因TaCPSF30编码序列的克隆及应用

权利要求书

1.一种小麦基因TaCPSF30编码序列的应用，其特征在于，所述小麦基因TaCPSF30编码序列是按照以下方法获得的：

（1）提取小麦总RNA，反转录合成cDNA；

（2）以cDNA为模板，设计特异引物，通过PCR扩增基因TaCPSF30编码区序列，其中，PCR扩增所用引物序列如下：TaCPSF30正向引物F：5’-CGGGGTACCATGGACGACGGCGACGGC-3’ ；TaCPSF30反向引物R：5’- CCGCTCGAG TCGCTTCCTTGACCGCCT-3’ ；

（3）回收并纯化(2)的扩增产物中目的片段并进行测序，测序正确的即为小麦基因TaCPSF30编码序列；

先构建出Gateway系统兼容的重组植物表达载体，该表达载体上有35S启动子驱动的TaCPSF30编码序列的克隆和GFP基因，然后将所述重组表达载体转化入拟南芥cpsf30突变体，筛选得到纯合的转基因异源互补株系，用于互补株系中小麦基因TaCPSF30在提高氮素利用率机制和遗传改良。

2.根据权利要求1所述的小麦基因TaCPSF30编码序列的应用，其特征在于，具体步骤如下：

S1，pENTR3C- TaCPSF30重组质粒的构建：

酶切连接所述小麦基因TaCPSF30编码序列与克隆载体pENTR3C：对纯化的小麦基因TaCPSF30编码序列在分别在5’端和3’端加入KpnI和XhoI酶切位点，双酶切后得到带有黏性末端的目的基因片段；然后与克隆载体pENTR3C进行酶切连接，得到重组质粒pENTR3C-TaCPSF30；

S2，利用Gateway技术构建重组植物表达载体pMDC83- TaCPSF30：

将测序正确的重组质粒pENTR3C- TaCPSF30与Gateway系统兼容的植物表达载体pMDC83进行LR反应，得到重组植物表达载体pMDC83- TaCPSF30；

S3，农杆菌侵染拟南芥：

种植拟南芥cpsf30突变体；制备农杆菌感受态细胞；然后用重组表达载体pMDC83-TaCPSF30转化农杆菌感受态细胞；挑取阳性克隆的转化农杆菌侵染拟南芥cpsf30突变体；得到能有效克隆小麦基因TaCPSF30编码序列的转基因植物体。

3.根据权利要求2所述的小麦基因TaCPSF30编码序列的应用，其特征在于，所述农杆菌为农杆菌GV3101。

4.根据权利要求2所述的小麦基因TaCPSF30编码序列的应用，其特征在于，所述植物体为拟南芥cpsf30突变体或者小麦品种中国春。

5.根据权利要求2所述的小麦基因TaCPSF30编码序列的应用，其特征在于，S3中挑取阳性克隆的转化农杆菌侵染拟南芥cpsf30突变体后，经过3代自交，筛选出含有小麦基因TaCPSF30编码序列的异源互补株系，用于小麦基因TaCPSF30编码序列在植物提高氮素利用率机制和遗传改良。