[发明专利]一种利用微通道模块化反应装置合成棕榈酰六肽的方法

权利要求书

1.一种利用微通道模块化反应装置合成棕榈酰六肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将活化后的Boc-Pro-OH、缩合试剂和有机溶剂三者形成的混合液，与H-Gly-OPg、DIEA和有机溶剂三者形成的混合液，分别同时泵入微通道模块化反应装置中的第一微结构反应器中进行氨基酸之间的缩合反应，15~40°C下停留时间4~20min；将第一微结构反应器流出液，与碳酸钠水溶液分别同时泵入到微通道模块化反应装置中的第二微结构反应器中进行洗涤，15~40°C下停留时间8~12min，洗涤后的流出液在静置分液装置中静置分层，保留有机层；将有机层，与TFA分别同时泵入微通道模块化反应装置中的第三微结构反应器中进行脱Boc保护的反应，15~40°C下停留时间5~15min；将第三微结构反应器的流出液用碳酸钠水溶液中和，中和后静置分液，保留有机层I；

（2）将活化后的Boc-Ala-OH替换步骤（1）中的Boc-Pro-OH，将步骤（1）得到的有机层I替换步骤（1）中所述的H-Gly-OPg、DIEA和有机溶剂三者形成的混合液，进行步骤（1）相同的反应和处理过程，得到有机层II；

（3）将活化后的Boc-Val-OH替换步骤（1）中的Boc-Pro-OH，将步骤（2）得到的有机层II替换步骤（1）中所述的H-Gly-OPg、DIEA和有机溶剂三者形成的混合液，进行步骤（1）相同的反应和处理过程，得到有机层III；

（4）将活化后的Boc-Gly-OH替换步骤（1）中的Boc-Pro-OH，将步骤（3）得到的有机层III替换步骤（1）中所述的H-Gly-OPg、DIEA和有机溶剂三者形成的混合液，进行步骤（1）相同的反应和处理过程，得到有机层IV；

（5）将活化后的Boc-Val-OH替换步骤（1）中的Boc-Pro-OH，将步骤（4）得到的有机层IV替换步骤（1）中所述的H-Gly-OPg、DIEA和有机溶剂三者形成的混合液，进行步骤（1）相同的反应和处理过程，得到有机层V，即为H-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-OPg；

（6）将活化后的棕榈酸，与步骤（5）得到的有机层V分别同时泵入微通道模块化反应装置中的第一微结构反应器中进行缩合反应，15~40°C下停留时间4~20min；将第一微结构反应器流出液，与碳酸钠水溶液分别同时泵入到微通道模块化反应装置中的第二微结构反应器中进行洗涤，15~40°C下停留时间8~12min，得到全保护的棕榈酰六肽Polmitoyl-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-OPg；

（7）将步骤（6）得到的全保护的棕榈酰六肽Polmitoyl-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-OPg进行切割Pg得到粗肽，并将粗肽经液相色谱进行制备纯化，得到棕榈酰六肽；

步骤（1）中，Boc-Pro-OH、缩合试剂和DIEA的摩尔比为1：1.2：1.67；Boc-Pro-OH与H-Gly-OPg的摩尔比控制为1.2：1；

步骤（1）中，活化后的Boc-Pro-OH与缩合试剂、有机胺和有机溶剂形成的混合液泵入第一微结构反应器的流速，与H-Gly-OPg和有机溶剂形成的混合液泵入第一微结构反应器的流速相同，分别为1.5~2.5ml/min；碳酸钠水溶液泵入第二微结构反应器的流速为4~6ml/min；有机层泵入第三微结构反应器的流速是3~5ml/min，TFA泵入第三微结构反应器的流速是0.5~1.5ml/min，控制有机层和TFA的流速比为4:1；

步骤（1）中，所述的活化后的Boc-Pro-OH、活化后的Boc-Ala-OH、活化后的Boc-Val-OH、活化后的Boc-Gly-OH、活化后的Boc-Val-OH、活化后的棕榈酸，是将Boc-Pro-OH、Boc-Ala-OH、Boc-Val-OH、Boc-Gly-OH、Boc-Val-OH、棕榈酸分别在有机溶剂中活化30min得到，所述的有机溶剂是乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、乙腈、DMF、二氯乙烷中的任意一种或几种任意比例的混合物；

步骤（6）中，活化后的棕榈酸泵入第一微结构反应器的流速为1.5~2.5ml/min，有机层V泵入第一微结构反应器的流速为1.5~2.5ml/min，控制棕榈酸与H-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-OPg的摩尔比为1：1；碳酸钠水溶液泵入第二微结构反应器中的流速为4~6ml/min；

步骤（7）中，切割方式依据Pg的选择调整，包括酸脱或者碱脱；Pg为Bzl、Me或TMES保护基；当Pg为Bzl保护基时，用钯碳加氢脱除后过滤；当Pg为Me保护基，用4mol/L的氢氧化钠皂化脱除；当Pg为TMES保护基，用四丁基氟化铵·三水脱除；

步骤（7）中，并将粗肽经液相色谱进行制备纯化，色谱条件为，流动相分别选用A为0.1%v/v AcOH/H₂O和B为0.1% v/vAcOH/MeCN，制备柱选用C18，20mmID×250mm，设置制备梯度为0min-5min-125min-140min 的时间对应B%含量为5%-20%-60%-95%，B%含量的增长过程为线性增长。