[发明专利]具核梭杆菌作为结直肠癌PD-L1抗体治疗疗效预测的标记物及其应用

说明书

本发明涉及一种用于免疫治疗结直肠癌的包含具核梭杆菌和PD‑L1抗体制剂及其应用、用于结直肠癌PD‑L1抗体治疗疗效预测的具核梭杆菌标记物及其应用。本发明深入研究具核梭杆菌对结直肠癌PD‑L1抗体免疫治疗的影响，发现PD‑L1单抗治疗对具核梭杆菌存在的结直肠癌更有效，而且PD‑L1单抗治疗明显延长了具核梭杆菌存在的结直肠癌小鼠的生存期，探讨其机制，发现具核梭杆菌可以转录调控PD‑L1的表达，而且具核梭杆菌存在的结直肠癌组织在PD‑L1抗体治疗后CD8阳性T细胞的比例增加，这些都有利于PD‑L1抗体治疗的效果。这表明具核梭杆菌的存在与否可以作为判断结直肠癌患者PD‑L1单抗治疗疗效的一个潜在标记物，并且具核梭杆菌与PD‑L1单抗可以作为结直肠癌患者免疫治疗制剂。

技术领域

本发明属于及生物医药技术领域，尤其涉及具核梭杆菌作为结直肠癌PD-L1抗体治疗疗效预测的标记物及其在结直肠癌免疫治疗中的应用。

背景技术

结直肠癌是常见恶性肿瘤之一。随着免疫治疗的发展，特别是“免疫检查点”PD-1、PD-L1和CTLA-4的单抗类药物都可以有效治疗多种肿瘤。但是结直肠癌的PD-1/PD-L1免疫治疗效果并不理想，整体有效率不足30％。其中很大一部分原因就是免疫治疗对什么类型的结直肠癌病人有效尚不清楚。因此，进一步探讨影响直肠癌患者免疫治疗效果的因素是结直肠癌患者精准治疗的关键环节。

结直肠癌患者的免疫治疗效果可能被不同的基因以及肿瘤微环境所影响。最近有研究发现，在PD-1治疗肿瘤过程中，肠道微生物的存在可以增强了PD-1抗体的免疫治疗效果。具核梭杆菌是寄居在人类肠道中的常见细菌，然而，具核梭杆菌是否影响肿瘤免疫治疗还不得而知。

发明内容

为了于克服现有技术中的缺陷，本发明对具核梭杆菌是否影响肿瘤免疫治疗进行深入研究，提供一种具核梭杆菌作为结直肠癌PD-L1抗体治疗疗效预测的标记物及其在结直肠癌免疫治疗中的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面是提供一种用于免疫治疗结直肠癌的制剂，其包含具核梭杆菌和PD-L1抗体。进一步地，所述制剂为试剂盒。

本发明的第二方面是提供一种具核梭杆菌在制备结直肠癌免疫治疗制剂中的应用，所述具核梭杆菌与PD-L1抗体联合使用。进一步地，所述PD-L1抗体腹腔注射，所述具核梭杆菌瘤内注射。

本发明的第三方面是提供一种用于结直肠癌PD-L1抗体治疗疗效预测的标记物，所述标记物为具核梭杆菌。

本发明的第四方面是具核梭杆菌作为结直肠癌PD-L1抗体治疗疗效预测标记物的应用。

为了进一步优化上述具核梭杆菌作为结直肠癌PD-L1抗体治疗疗效预测标记物的应用，本发明采取的技术措施还包括：

进一步地，在所述应用中，所述具核梭杆菌的检测步骤包括：

步骤1)提取结直肠癌病人样本中的DNA；

步骤2)提取的DNA采用用紫外分光光度计检测浓度与纯度，以确定符合提取要求的DNA；

步骤3)对符合提取要求的DNA采用针对具核梭杆菌的引物及探针序列进行RT-PCR扩增反应，对PCR反应产物进行荧光检测，根据CT值判断样本中是否存在具核梭杆菌。

进一步地，所述样本包括但不限于粪便样本、肿瘤组织、石蜡切片等。

进一步地，所述符合提取要求的DNA在OD260处有显著吸收峰，OD260/OD280比值为1.7-1.9。

进一步地，所述具核梭杆菌的引物包括SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：2所示序列，所述具核梭杆菌的探针包括SEQ ID NO：5所示序列。