[发明专利]一种螺旋藻中小分子肽的提取方法

说明书

本发明涉及小分子肽提取领域，特别涉及一种螺旋藻中小分子肽的提取方法，包括：破壁、提取、纯化步骤；特别是所述破壁是将螺旋藻真空冷冻至温度为零下20‑零下10℃后，将螺旋藻与硝石、酵母硒按照1:(0.1‑0.3):(0.04‑0.07)的质量比混合研磨至过50‑80目筛，本发明具有得率高、提取时间短、不易失活、纯度高、生物活性优、提取效率高、成本低、操作工艺简单特点。

技术领域

本发明涉及小分子肽提取领域，特别涉及一种螺旋藻中小分子肽的提取方法。

背景技术

螺旋藻属于蓝细菌，是一种丝状多细胞螺旋体的原核藻类生物，具有很高的营养价值，其蛋白质含量高达60-70％，是目前已知食物中最高的，而且含有丰富的氨基酸、维生素、脂肪、类胡萝卜素、多糖以及空物质，安全无毒，具有广阔的开发前景和价值。

生物活性肽是由氨基酸组成的具有生物活性的肽类化合物。小分子的活性肽不仅能够提供基体生长发育所需的营养物质，还具有增强免疫力、抑制细菌、抗氧化等功能。与游离氨基酸和蛋白质相比，肽能够更好、更快地被基体吸收。目前关于螺旋藻制备活性肽的研究较少。如专利号CN201210375126.8提供了一种提取螺旋藻小分子肽的方法，将螺旋藻进行预处理，调整料液比为0.5～8g/L，pH值为5-10，充分混合后进行泡沫分离，泡沫分离螺旋藻得到的泡沫提取液是分子量为5000Da的小分子生物活性肽。该方法获得螺旋藻蛋白的溶解率仅达12.6％，富集比达4.4，其在产率和纯度方面仍不理想；且在柱层析中难以得到高纯度产物，操作较为繁琐、费时间；并且采用传统破壁方法，提取时间长、效率低、且易变性。

发明内容

本发明为了现有技术问题，提供了一种螺旋藻中小分子肽的提取方法。

具体通过以下技术方案实现：

一种螺旋藻中小分子肽的提取方法，包括：破壁、提取、纯化步骤；特别是所述破壁是将螺旋藻真空冷冻至温度为零下20-零下10℃后，将螺旋藻与硝石、酵母硒按照1:(0.1-0.3):(0.04-0.07)的质量比混合研磨至过50-80目筛。

所述提取的方法为：向破壁所得破壁物中加入螺旋藻质量2-2.5倍的磁化去离子水，先用脉冲电场处理，再混合搅拌10-15min。

所述磁化去离子水是将去离子水用强力磁化机进行磁化，在强度为500-650T的磁场下磁化5-7s。

所述脉冲电场的工作条件为：场强25-45kV/cm，频率1-3kHz，脉宽为5-10微秒，脉冲处理个数为15-20。

所述纯化的方法为：

(1)将提取液以10-20mL/min的流速，通过吸附填料进行脱色纯化后洗脱，收集洗脱液；

(2)将洗脱液用中空纤维膜进行超滤。

所述吸附填料为硅胶、氧化铝、改性鸡蛋壳按质量比为1：(0.3-0.6)：(0.05-0.07)。

所述改性鸡蛋壳是将鸡蛋壳研磨至过100目筛后，然后加入羟丙基甲基纤维素钠进行改性；羟丙基甲基纤维素钠的用量为鸡蛋壳质量5-8％。

所述洗脱是用浓度为0.01-0.03mol/L的磷酸盐缓冲溶液进行洗脱。

所述中空纤维膜的截留分子量为100-200KDa。

有益效果：

本发明具有得率高、提取时间短、不易失活、纯度高、生物活性优、提取效率高、成本低、操作工艺简单特点，具体表现在以下几个方面：