[发明专利]一种红麻线粒体蛋白COX3抗原多肽及制备多克隆抗体的方法和应用

说明书

本发明涉及生物蛋白分子技术领域，特别是指一种红麻线粒体蛋白COX3抗原多肽及制备多克隆抗体的方法和应用。所述抗原多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。将抗原多肽与载体蛋白KLH偶联，得到多肽‐KLH偶联复合蛋白；与等体积的弗氏完全佐剂充分混匀乳化后，免疫动物；采集动物的血清，当效价达到1:20000以上采用颈动脉放血方式收集动物血液，制备抗体血清；通过亲和层析纯化抗体血清，得到红麻线粒体蛋白COX3多克隆抗体。本发明通过合成红麻COX3多克隆抗体，检测红麻COX3蛋白在红麻不同细胞质中表达差异，以明确COX3对红麻花药发育的重要影响。

技术领域

本发明涉及生物蛋白分子技术领域，特别是指一种红麻线粒体蛋白COX3抗原多肽制备多克隆抗体的方法和应用。

背景技术

完整的线粒体基因转录本是研究植物线粒体基因表达的重要基础。CR-RT-PCR是研究基因转录起始位点和终止位点以及线粒体基因转录本5’和3’转录剪切方式的重要方法(Kuhn and Binder, 2002; 张丹丹, 2016)。5’端存在多个转录起始位点是植物线粒体基因的普遍特征。Kuhn等在12个拟南芥线粒体基因中共发现30个转录起始位点，其中9个线粒体基因含多个转录起始位点，但3’末端只有一个终止位点(Kuhn et al., 2005;Forneret al., 2007)；水稻HL-CMS的atp6-orfH79的5’端有2个转录起始位点，同时水稻线粒体基因atp1，atp6和atp9转录本的5’也存在多个转录位点，而3’端只有一个终止位点(Wang etal., 2013; Kazama et al., 2013)，红麻线粒体基因atp1、atp4和cox3转录本的3’也只有一个转录终止位点，但转录本的5’端存在多个转录起始位点，说明植物mRNA 5’端的不一致性与线粒体基因的翻译有关，并受到核基因的调控(Kazama et al., 2008; Koizuka etal., 2003)。RNA加工因子RPF2具有三角五肽状重复序列特征是高等植物线粒体5’mRNA所必需的，RPF2参与线粒体基因nad9和cox3 mRNA 5’端的形成(Jonietz et al., 2010)。atp9转录本5’转录起始位点在两种胞质中一致，而不育系3’转录终止位点比保持系短126bp，这与甜菜不育胞质和可育胞质rps3转录本5’转录起始位点相同，但不育胞质的3’转录终止末端比可育胞质缺少460 bp的研究结果一致(Matsunaga et al., 2011)，表明线粒体基因的转录调控存在多样性。