[发明专利]一种纳豆激酶冻干粉的制备方法

说明书

本发明公开一种纳豆激酶冻干粉的制备方法，涉及发酵技术领域。所述纳豆激酶冻干粉的制备方法包括以下步骤：取纳豆菌液态发酵得到的发酵液进行离心分离，得不含菌体和不溶物的粗菌液；将所述粗菌液经二级膜分离处理，得到浓缩液；将保护剂溶于所述浓缩液中，得混合溶液；将所述混合溶液初步冷冻至混合溶液完全凝固，得冷冻物；将所述冷冻物冷冻干燥，得纳豆激酶冻干粉。本发明提出的制备方法简单易操作，制备的纳豆激酶冻干粉水分分布均匀且含水量较低，易于长期有效保存，且具有较高的纯度和酶活力。

技术领域

本发明涉及发酵技术领域，特别涉及一种纳豆激酶冻干粉的制备方法。

背景技术

纳豆激酶又名枯草杆菌蛋白酶，是在纳豆发酵过程中由纳豆枯草杆菌产生的一种丝氨酸蛋白酶，具有溶解血栓，降低血粘度，改善血液循环，软化和增加血管弹性等作用。

目前市场上所售的纳豆激酶类产品大部分是由纳豆经固态发酵后干燥制得的纳豆激酶干粉。其中，传统的高温干燥方法会严重损伤纳豆激酶的活性，导致产品酶活性较低；低温真空干燥虽然对纳豆激酶活性损失较少，但低温真空干燥处理时，容易使纳豆激酶产品表面结块，致使产品中水分分布不均匀、产品内部干燥不充分，进而导致产品不易长期储存。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种纳豆激酶冻干粉的制备方法，旨在解决现有的纳豆激酶冻干粉酶活低以及干燥效果差以致不易长期储存的问题。

为实现上述目的，本发明提出一种纳豆激酶冻干粉的制备方法，所述纳豆激酶冻干粉的制备方法包括以下步骤：

取纳豆菌液态发酵得到的发酵液进行离心分离，得不含菌体和不溶物的粗菌液；

将所述粗菌液经二级膜分离处理，得到浓缩液；

将保护剂溶于所述浓缩液中，得混合溶液；

将所述混合溶液初步冷冻至混合溶液完全凝固，得冷冻物；

将所述冷冻物冷冻干燥，得纳豆激酶冻干粉。

优选地，所述将所述粗菌液经二级膜分离处理，得到浓缩液的步骤包括：

将所述粗菌液通过截留分子量为45～50KDa的超滤膜过滤，收集透过液；

将所述透过液通过截留分子量为15～10KDa的超滤膜浓缩，得到浓缩液。

优选地，所述将保护剂溶于所述浓缩液中，得混合溶液的步骤中，所述保护剂为以下物质中的一种或者几种的混合物：葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、果糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、葡聚糖、聚乙二醇、聚维酮和甘氨酸。

优选地，所述将保护剂溶于所述浓缩液中，得混合溶液的步骤中，每100ml所述浓缩液中加入所述保护剂(4～15)g。

优选地，所述将所述混合溶液初步冷冻至混合溶液完全凝固，得冷冻物的步骤中，所述初步冷冻的温度为-75℃～-80℃，所述初步冷冻的时间为8～16h。

优选地，所述将所述冷冻物冷冻干燥，得纳豆激酶冻干粉的步骤中，所述冷冻干燥的温度为-40℃～-60℃，所述冷冻干燥的时间为24～72h。

优选地，所述将所述冷冻物冷冻干燥，得纳豆激酶冻干粉的步骤中，所述纳豆激酶冻干粉的含水量小于6％。

优选地，所述取纳豆菌液态发酵得到的发酵液进行离心分离，得不含菌体和不溶物的粗菌液的步骤中，所述纳豆菌液态发酵的步骤包括：

取高酶活的菌种接种于培养基中培养，形成菌落；

在所述菌落中挑取单菌落扩大培养，形成种子液；

将所述种子液接种于发酵培养基中培养，得发酵液。