[发明专利]一种聚乙烯亚胺接枝米糠多糖及其制备方法及基因载体

说明书

本发明公开一种聚乙烯亚胺接枝米糠多糖及其制备方法及基因载体，涉及基因载体技术领域。所述聚乙烯亚胺接枝米糠多糖的制备方法包括：向米糠多糖的水溶液中加入高碘酸钾形成反应液后，对反应液进行透析，得透析液；将聚乙烯亚胺溶于缓冲液中，形成聚乙烯亚胺溶液；将透析液加入到聚乙烯亚胺溶液中搅拌反应形成反应溶液，并控制反应溶液呈碱性；将硼氢化钠加入到反应溶液中，形成初样液；对初样液进行透析，取透过液醇沉、离心、冷冻干燥后得聚乙烯亚胺接枝米糠多糖。本发明还提出一种基因载体，包括聚乙烯亚胺接枝米糠多糖。本发明制得的聚乙烯亚胺接枝米糠多糖具有较低的细胞毒性和良好的生物兼容性，可以作为一种优质的基因载体应用。

技术领域

本发明涉及基因载体技术领域，特别涉及一种聚乙烯亚胺接枝米糠多糖及其制备方法及基因载体。

背景技术

裸露的外源基因DNA难以进入细胞且容易被机体或细胞降解，因而难以表达，所以应寻找对病变组织具有选择性、高转染率及低毒性的载体协助目的基因进入靶细胞，用于转运目的基因进入靶细胞的载体即为基因载体，选择合适的基因载体是基因治疗的成功关键。基因载体主要有病毒载体和非病毒载体两类。

聚乙烯亚胺是目前最具代表性的高效基因载体之一，但其存在生物兼容性差、细胞毒性较高的缺点，尚需改进。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种聚乙烯亚胺接枝米糠多糖及其制备方法及基因载体，旨在制备一种聚乙烯亚胺接枝米糠多糖，具有较低的细胞毒性和良好的生物兼容性，可以作为一种优质的基因载体应用。

为实现上述目的，本发明提出一种聚乙烯亚胺接枝米糠多糖，所述聚乙烯亚胺接枝米糠多糖具有以下结构式(1)所示结构。

结构式(1)：

为实现上述目的，本发明还提出了一种聚乙烯亚胺接枝米糠多糖的制备方法，所述聚乙烯亚胺接枝米糠多糖的制备方法包括以下步骤：

向米糠多糖的水溶液中加入高碘酸钾，避光搅拌形成反应液后，对所述反应液进行透析，得透析液；

将聚乙烯亚胺溶于缓冲液中，形成聚乙烯亚胺溶液；

将所述透析液加入到所述聚乙烯亚胺溶液中搅拌反应形成反应溶液，并在搅拌过程中控制反应溶液呈碱性；

将硼氢化钠加入到所述反应溶液中，搅拌反应形成初样液；

对所述初样液进行透析，取透过液醇沉、离心、冷冻干燥后得聚乙烯亚胺接枝米糠多糖。

优选地，所述向米糠多糖的水溶液中加入高碘酸钾，避光搅拌形成反应液后，对所述反应液进行透析，得透析液的步骤中，

所述避光搅拌时间为24～48h；和/或，

所述透析的时间为36～48h。

优选地，所述将聚乙烯亚胺溶于缓冲液中，形成聚乙烯亚胺溶液的步骤中，

所述缓冲液为pH9.0磷酸盐缓冲液。

优选地，将所述透析液加入到所述聚乙烯亚胺溶液中搅拌反应形成反应溶液，并在搅拌过程中控制反应溶液呈碱性的步骤包括：

将所述透析液滴加到所述聚乙烯亚胺溶液中搅拌反应30～36h形成反应溶液，并在滴加过程中，向所述反应溶液中滴加氢氧化钠溶液以控制所述反应溶液的pH值在8.8～9.2范围内；

其中，所述将所述透析液滴加到所述聚乙烯亚胺溶液中的时间不大于1h。

优选地，米糠多糖、高碘酸钾、聚乙烯亚胺和硼氢化钠的质量比为1：(1.5～2.0):(2.5～4.0)：(1.5～4)。