[发明专利]啶虫脒原药对蚯蚓繁殖的毒性试验方法

权利要求书

1.啶虫脒原药对蚯蚓繁殖的毒性试验方法，其特征在于：包括以下步骤：

A、选取供试品和参比物质：选取97％啶虫脒原药为供试品，且选95％多菌灵为参比物质；

B、选取试验仪器：BSA223S型电子天平、TSC-100型电子台秤、JJ-5水泥胶砂搅拌机、Y112M-4搅拌机、SX-620型笔式pH计、KQ2200型超声波清洗器、ZOGLABDSR-TH-RA型温湿度记录仪、移液枪、容量瓶、量筒和烧杯等；

C、选取供试生物：选择赤子爱胜蚯蚓作为供试生物，且蚯蚓引入后在温度为18.0℃-22.0℃，相对湿度为70％-90％，黑暗条件下进行饲养，试验前，将选好的试验蚯蚓要在人工土壤中驯养7d，驯养期间的食物与试验期间的食物相同，试验选用体重在0.300g-0.600g之间的二月龄以上蚯蚓，试验用人工土壤由10％草炭、20％高岭黏土、70％工业石英砂和0.1-0.3％碳酸钙组成，充分混匀后待用；

D、调整试验条件：试验温度为20±2℃，光照强度为400Lux–800Lux，光照∶黑暗时间比为16h∶8h，试验开始后1d、8d、15d和22d，向每个容器添加约5.00g磨碎的燕麦片到土壤表面并用适量的水湿润，成蚓在试验开始后第28d移出，并向每个容器补充约5.00g食物，剩余时间不再饲喂，移出成蚓后，含有蚓茧的土壤在相同条件下继续培养4周；

E、试验浓度设计：试验选取的97％啶虫脒原药以1.52mg a.i./kg_干土为最高浓度，按等比系数1.67设置1.52、0.910、0.545、0.326、0.195、0.117、0.070、0.042mg a.i./kg_干土共8个处理浓度，同时设置不加药处理为空白对照；；

F、试验溶液的配制：试验溶液包括97％啶虫脒原药溶液和95％多菌灵原药溶液，其配制步骤如下：

a、用BSA223S型电子天平称取97％啶虫脒原药样品0.500g于一次性塑料杯中，用自来水定容到100mL后，可得浓度为4850mg a.i./L的试验母液，试验时，用自来水稀释至5.07、3.04、1.82、1.09、0.652、0.390、0.234、0.140mg a.i./L各试验浓度；

b、用BSA223S型电子天平称取一定量的95％多菌灵原药样品，用约10mL丙酮溶解后，再与10g石英砂混合均匀，然后将其置于通风橱中，待丙酮挥发后再将其与490g土壤均匀混合，然后加水调节湿度到30％；

G、染毒：采用人工土壤混药的方法，试验时取各浓度药液150mL加入到0.5kg人工土壤中，充分拌匀后调节土壤水分达到30％，然后将土壤转入1000mL烧杯中，试验开始时，将每组10条蚯蚓清洗后放在滤纸上去除多余水分，分别称重后放入烧杯中，然后用保鲜膜封好杯口并用大头针扎些小洞，一个烧杯为1重复，各处理设4个重复，每个重复10条蚯蚓，对照组设8个重复；

H、结果调查：试验开始时称量加入每个试验容器成蚓的总体重，染毒4周后称量每个试验容器的存活成蚓的总体重，调查并记录蚯蚓死亡情况，试验结束时调查并记录每个容器中幼蚓的数量；

I、采用DPS统计分析软件，将蚯蚓繁殖毒性数据进行统计分析，求出EC₅₀和NOEC；

J、质量控制：试验期间，每个重复的受试蚯蚓在试验结束时繁殖的幼虫数量≥30条；繁殖的变异系数≤30％；最初4周的成蚓死亡率≤10％；试验结束时与试验开始时含水量的变化率不能超过10％。

2.根据权利要求1所述的啶虫脒原药对蚯蚓繁殖的毒性试验方法，其特征在于：所述步骤D中向每个容器添加大约5-6mL水。

3.根据权利要求1所述的啶虫脒原药对蚯蚓繁殖的毒性试验方法，其特征在于：所述步骤I中DPS统计分析软件的版本号为V14.10。

4.根据权利要求1所述的啶虫脒原药对蚯蚓繁殖的毒性试验方法，其特征在于：所述步骤C中饲养期间，每间隔3-7d喂以磨碎的燕麦片。

5.根据权利要求1所述的啶虫脒原药对蚯蚓繁殖的毒性试验方法，其特征在于：所述步骤E中多菌灵处理浓度为1.02mg a.i./kg_干土和5.10mg a.i./kg_干土。