[发明专利]一种烟草抗肿瘤活性组分的提取方法及其应用

说明书

本发明提供一种烟草抗肿瘤活性组分的提取方法及其应用，其中方法包括：通过对烟草原料进行超微粉碎，并针对超微粉碎后的烟草原料依次进行常温提取、高温提取、甲醇提取、丙酮提取四次操作，且依次使用高极性溶剂纯化水、甲醇、丙酮作为提取溶剂，取烟草丙酮提取物浓缩浸膏通过制备液相进行色谱分离，获得组分通过细胞活性实验筛选活性最强组分进一步分离，再次通过细胞活性实验筛选得到的活性最强组分即为本发明目的组分。该方法重复性好，得到的抗肿瘤活性组分可用于制备抗肿瘤药物。

技术领域

本发明涉及烟草产品加工提取技术领域，具体涉及一种烟草抗肿瘤活性组分的提取方法及其应用

背景技术

烟草也称仙草，是一味传统的中药材，它的无机成分包括水、矿质元素；有机成分主要包括糖类、生物碱、杂环类、色素、酚类、萜类、有机酸类、脂质类、醇类、醛酮类等。其中，烟草中有机成分具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化活性、清除体内自由基等多种功能。

目前，为了实现对烟草活性组分的提取，一般采用超临界提取、索氏提取、超声波提取方式。采用无水乙醇、正己烷、丙酮、乙酸乙酯、石油醚、二氯甲烷作为提取溶剂。其中低极性溶剂如石油醚、正己烷，中极性溶剂丙酮、二氯甲烷，这些溶剂多为易挥发、易燃、有毒溶剂，对工业生产设备、人员等要求高，且得到的烟草活性组分的含量少，这就大大限制了烟草活性组分的进一步研究和应用。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种烟草抗肿瘤活性组分的提取方法及其应用，以提高烟草活性组分的提取量。

第一方面，本发明提供了一种烟草抗肿瘤活性组分的提取方法，该方法包括以下步骤：

(1)预处理：对烟草原料进行烘干处理，以及将烘干处理后的烟草原料进行超微粉碎处理，得到烟草超微粉；

(2)常温水提：在烟草超微粉中加入提取溶剂，在常温条件下进行提取操作；对提取操作后的烟草超微粉进行离心处理，并收集离心处理后的沉淀物；步骤(2)中的提取溶剂为纯化水；

(3)高温水提：在步骤(2)中收集的沉淀物中加入提取溶剂，在90-100℃的提取温度下进行浓缩提取操作；对浓缩提取操作后得到的浓缩提取液进行降温处理、离心处理，并收集离心处理后的沉淀物；步骤(3)中的提取溶剂为纯化水；

(4)甲醇提取：在步骤(3)中得到的沉淀物中加入提取溶剂，在0-4℃的提取温度下进行浸提提取操作，对浸渍提取物进行离心处理，并收集离心处理后的上清，将收集的上清进行旋转蒸发浓缩烘干处理；步骤(4)中的提取溶剂为85-100％的甲醇；

(5)丙酮提取：在步骤(4)中得到的沉淀物中加入提取溶剂，在0-4℃的提取温度下进行浸提提取操作，对浸渍提取物进行离心处理，并收集离心处理后的上清，将收集的上清进行旋转蒸发浓缩烘干处理，得到烟草活性组分；步骤(5)中的提取溶剂为85-100％的丙酮；

(6)烟草活性组分分离：在步骤(5)中得到的上清液进行浓缩烘干处理，配制样品制备液相进行分离，分离得到的组分进行活性筛选，具有活性的组分再进一步分离；

(7)在步骤(6)中得到的具有活性组分的样品，制备液相进行分离，分离得到的组分进行活性筛选，选取活性最强的组分；

(8)质谱分析：在步骤(7)中制备液相分离出来具有抗肿瘤活性的组分，质谱进样，得到其所有可能性的结构式。

其中，步骤(1)中的烘干处理是将烟草原料放置在烘箱中进行烘干，使得烘干处理后的烟草原料的含水量小于5％，烘干温度为50-60℃，烘制时间为4-8h；

和/或，步骤(1)中的超微粉碎处理是将烘干处理后的烟草原料，使用50-80目筛网的粉碎机进行粉碎处理，并对粉碎处理后的烟草原料，使用200-400目筛网的粉碎机进行粉碎处理，得到所述烟草超微粉。