[发明专利]一种基于纳米Co3

权利要求书

1.一种基于纳米Co₃O₄模拟酶催化作用的信号双放大的玉米赤霉烯酮阻抗传感器的制备方法，其特征在于，以下步骤：

（1） 玻碳电极依次用50纳米和30纳米的氧化铝粉末在湿润的麂皮上进行机械打磨抛光，然后用二次蒸馏水和无水乙醇进行多次冲洗，直至电极表面干净光亮；

（2）移取5 μL浓度为 3mg/L的透明质酸功能化的TiO₂介晶溶液TiO₂@Hya滴加至洁净的玻碳电极的表面，放至在红外灯箱内烘干，取出，冷却至室温，由此制备出TiO₂@Hya修饰的玻碳电极；

（3）滴加体积比为2：1的1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐EDC和N-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐 NHS的混合溶液于步骤（2）中制得的电极表面活化羧基30min,然后用二次蒸馏水进行冲洗，在室温下晾干备用；

（4）滴加5 μL浓度为50 μg/mL的玉米赤霉烯酮的单克隆抗体Ab₁溶液至步骤（3）所得的电极表面，并在室温条件下孵育50min,用二次蒸馏水冲洗除去多余的物理吸附，室温下晾干，制得Ab₁/ TiO₂@Hya修饰的玻碳电极；

（5）滴加5μL浓度为 1.0 wt.%的牛血清白蛋白BSA溶液于步骤（4）制得的电极表面，并在室温条件下孵育30min，以此来封闭电极表面的非特异性活性位点，用二次蒸馏水进行冲洗洗去表面物理吸附，晾干备用；

（6）取不同浓度的玉米赤霉烯酮ZEA标准溶液滴加至步骤（5）制得的电极表面，并在室温条件下孵育40min,孵育完成后用二次蒸馏水进行冲洗除去电极表面的非特异性吸附，制得ZEA/Ab₁/ TiO₂@Hya修饰的玻碳电极，在室温下晾干备用；

（7）移取所制备好的Co₃O₄和玉米赤霉烯酮抗体Ab₂复合溶液Co₃O₄@ Ab₂ 5μL滴至实验步骤（6）制备好的电极表面，用二次蒸馏水冲洗表面的物理吸附，晾干，得到Co₃O₄@ Ab₂/ZEA/Ab₁/ TiO₂@Hya修饰的玻碳电极；

（8）将步骤（7）中的修饰电极浸没在含有10mg/mL 4-氯-1-萘酚的水溶液和10 wt %H₂O₂的溶液中，在电极表面生成生物沉积，25min后取出晾干，于三电极系统中测量其阻抗大小的变化。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的TiO₂介晶由下述方法制备的：0.5g的十二烷基苯磺酸钠溶解于25 mL的2.2 mol/L的HNO₃溶液中，持续搅拌震荡数十分钟后加入500 µL的钛酸异丙酯，然后将上述混合物在48 °C 条件下持续震荡24小时，随后混合物用去离子水和无水乙醇冲洗数次，在60°C条件下干燥过夜；干燥后在400 °C下煅烧60min，以充分去除残余的有机物，得到最终产物；将所得产物分散在去离子水中，储存在4°C冰箱中备用。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的透明质酸功能化的TiO₂介晶溶液由下述方法制备的:将500μL浓度为5mg/mL的透明质酸溶液和500μL浓度为5mg/mL的TiO₂介晶在室温中混合震荡1h,随后离心洗涤数次，重新分散在二次蒸馏水中制得。