[发明专利]一种脑恶性肿瘤细胞联合定量检测卡及其制备方法和使用方法

说明书

本发明公开了一种脑恶性肿瘤细胞联合定量检测卡及其制备方法和使用方法，包括底卡和面卡，所述底卡上设有：加样区，结合区，微通道，时间阀，检测区以及收集区，所述加样区位于微通道的一端，所述结合区通过微通道和时间阀连接一个或多个检测区位于微通道的另一端，所述检测区通过微通道连接收集区，所述加样区内设置多个加样腔，所述加样腔为圆柱体微通道，其底部直接连接至结合区；本发明通过微流控技术控制待测样品的流速和流量，具有同一种标志物的循环肿瘤细胞通过一条微通道进入检测区，避免相互干扰，从而减少误差，增加反应灵敏度；将待测样品制备成水包水微液滴，增大检测限度。

技术领域

本发明涉及微流控技术和免疫荧光微球免疫层析技术相结合的技术领域，具体涉及一种脑恶性肿瘤细胞联合定量检测卡及其制备方法和使用方法。

背景技术

近几年，颅内肿瘤发病率呈上升趋势，据统计，颅内肿瘤约占全身肿瘤的5％，占儿童肿瘤的70％，而其它恶性肿瘤最终会有20-30％转入颅内，由于其膨胀的浸润性生长，在颅内一旦占据一定空间时，不论其性质是良性还是恶性，都势必使颅内压升高，压迫脑组织，导致中枢神经损害，危及患者生命。生长于颅内的肿瘤通称为脑瘤，包括由脑实质发生的原发性脑瘤和由身体其他部位转移至颅内的继发性脑瘤。其病因至今不明，肿瘤发生自脑、脑膜、脑垂体、颅神经、脑血管和胚胎残余组织者，称为原发性颅内肿瘤。由身体其它脏器组织的恶性肿瘤转移至颅内者，称为继发性颅内肿瘤。颅内肿瘤可发生于任何年龄，以20-50岁为最多见。

脑恶性肿瘤标识物是指特征性存在于脑的恶性肿瘤细胞，或由脑恶性肿瘤细胞异常产生的物质，或是宿主对脑恶性肿瘤的刺激反应而产生的物质，并能反映脑恶性肿瘤发生、发展，监测脑恶性肿瘤对治疗反应的一类物质。目前对于脑肿瘤的诊断与监测手段主要有S100蛋白、神经原特异性烯醇化酶(NSE)、甲胎蛋白(AFP)、DNA修复蛋白O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)、3-甲基-4-羟基杏仁酸(VMA)、同香草酸(HVA)等血清肿瘤标志物检测。

微流控技术(Microfludics)是指在至少有一维为微米甚至纳米尺度的低维通道结构中控制体积为皮升至纳升的流体进行流动并传质、传热的技术。实现微流控操控的主要方法就是将流体限制在一个微米甚至纳米尺度的通道中，流体在微流控的微通道中具有独特的流体性质，如层流、液滴等等。当微通道在微米甚至纳米尺度时，微通道表面积与其内部体积比很大，通道的结构、形状和壁面性质都对流体的流动状态产生极大影响。因此，微流控可以实现一系列常规方法难以完成的微加工和微操作。时间阀的作用就是在固定的时间内控制通过微通道的流体的流速和流量，可以严格控制整个反应的时间并且控制进入检测区的流体的量。

荧光微球是指将荧光团通过包埋、共价键连接等方式引入有机或无机纳米粒子中，并让纳米粒子承担有机小分子荧光染料的检测、标记等功能，具有相对稳定的形态结构以及发光行为。荧光微球免疫层析技术是继胶体金免疫层析技术后，在荧光染料标记技术上发展起来的，作为一种免疫学检测方法，它是免疫亲和技术、免疫标记技术、免疫层析技术的结合，与胶体金免疫层析技术一样具有快速、操作简便等优点。

目前临床检验脑恶性肿瘤的手段，诸如血清鉴定、医学影像扫描、组织病理学切片等。如利用血清鉴定，由于个体差异导致有些脑恶性肿瘤缺乏高度特异性的标志物不能被有效检出，其可靠性较差；医学影像扫描可以非侵入地、快速地对患者的脑恶性肿瘤情况进行评估，但即使是最先进准确的影像检测方法，脑恶性肿瘤检出直径至少也要在2～3mm，即小于该直径范围的脑恶性肿瘤通过影像学检查往往不能被发现，所以只能应用于癌症中晚期的检测；组织病理学切片往往根据穿刺或术后取出的脑恶性肿瘤组织才能鉴定，且技术要求较高，无法做到反复多次、长期或随时获取，此外，该方法还具有一定的创伤性且不能准确判定是否有转移情况发生。

综上所述，如果可以早期发现，早期治疗，则对提高患者生活质量，延长生命至关重要。因此，早期发现对脑肿瘤来说就显得非常重要了。

发明内容