[发明专利]检测锦鲤疱疹病毒的试剂盒

说明书

本发明提供一种检测锦鲤疱疹病毒的试剂盒，适用于聚合酶连锁反应，试剂盒包含引物对，引物对包含如序列辨识编号1所示的正向引物和序列辨识编号2所示的反向引物。由此，可以快速且特异性地自待测样本中检测锦鲤疱疹病毒。

技术领域

本发明是有关一种核酸的测定和检验方法，特别是有关于一种利用聚合酶连锁反应检测锦鲤疱疹病毒的试剂盒及其检验方法。

背景技术

鲤鱼在许多国家是食用鱼类，观赏用的锦鲤(KOI)则是爱鱼成癖者喜爱的宠物及展示用鱼。锦鲤有些售价高达数万元，每年在全世界生产值达数十亿美元。然而鲤鱼、锦鲤及其普通变种被锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)感染后，会使鱼体罹患锦鲤疱疹病毒病(Koi herpesvirus disease,KHVD)，其为一种高致病性急性传染病。自1996年英国从大量的死亡的鲤鱼组织中检测出锦鲤疱疹病毒的DNA，以及1998年德国和以色列报导锦鲤疱疹病毒病以来，由于欠缺疫病知识和检测方法，锦鲤疱疹病毒病已通过国际贸易进一步扩散并在世界范围内流行。目前已有很多国家和地区发生或者进口鱼中患有锦鲤疱疹病毒病，使锦鲤及鲤鱼产业造成了巨大经济损失。在欧洲，包括奥地利、比利时、丹麦、法国、意大利、卢森堡、荷兰、波兰、瑞典、罗马尼亚、斯洛文尼亚、西班牙等，亚洲有中国香港、中国台湾、印度尼西亚、日本、韩国、马来西亚、新加坡(从马来西亚进口鱼中发现)和泰国(从德国进口鱼中发现)。南非、加拿大和美国也报导发生锦鲤疱疹病毒病。可能有更多的国家或地区也存在锦鲤疱疹病毒病，但还未被鉴定或报导。

锦鲤疱疹病毒被分类为鲤科疱疹病毒的第三类(Cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3)，具有典型的二十面体结构，核衣壳的直径约为100～110nm，外被包含脂质囊膜，病毒颗粒的直径约为167～200nm，为线性双股DNA病毒，基因组大小为295kb。据推测病毒基因组含有156个开放性阅读框(ORF)。将以色列、美国和日本三株病毒的全基因序列进行分析发现，其病毒在基因水平上高度相似，可能来源于统一野生父本的2个谱系-J-日本谱系(亚洲谱系)和U/I-以色列/美国谱系(欧洲谱系)。近年在法国的研究发现还存在介于J和U/I谱系的第三谱系。此外，2011年在印度尼西亚亦发现第四谱系。

患有锦鲤疱疹病毒病的鱼体在临床上可能出现身体失衡、皮肤苍白或发红、皮肤或鳃粘液分泌过度或不足、皮肤和鳍根部出血、鳍条糜烂以及鱼眼凹陷等症状，并伴有寄生虫和细菌感染。感染鱼的鳃、肾、脾是锦鲤疱疹病毒的主要富集器官。感染群体发病率为100％，死亡率达70-80％，甚至有高达90％或100％的报导。锦鲤疱疹病毒病主要受水温影响，多发在春秋季节。易发水温为18～28℃，23～28℃容易引起爆发流行。鉴于锦鲤疱疹病毒病危害的严重性，世界动物卫生组织(OIE)将其列入疫病名录。因此开发快速、方便及准确诊断锦鲤疱疹病毒的检验方法，以方便锦鲤睡眠病的现场或实验室检测至为关键。

发明内容

有鉴于此，本发明的一目的是在提供一种检测锦鲤疱疹病毒的试剂盒，可以快速且特异性地自待测样本中检测锦鲤疱疹病毒。

本发明的一方式是在提供一种检测锦鲤疱疹病毒的试剂盒，用于隔绝恒温式聚合酶连锁反应且包含一引物对，所述引物对包含一序列辨识编号1所示的正向引物以及一序列辨识编号2所示的反向引物。

依据前述的检测锦鲤疱疹病毒的试剂盒，可更包含一接样环组件，用以将一待测样本转移至一试验管中。

依据前述的检测锦鲤疱疹病毒的试剂盒，可更包含一阳性对照组核酸干粉。

依据前述的检测锦鲤疱疹病毒的试剂盒，可更包含一如序列辨识编号3所示的荧光探针。