[发明专利]3′-羟基染料木黄酮的制备方法及其用途

说明书

本发明提供了一种3′‑羟基染料木黄酮的制备方法及其用途，所述方法利用导入络氨酸酶基因的重组大肠杆菌，将基因重组大肠杆菌活化培养诱发络氨酸酶基因表现后，将染料木黄酮通过生物转化为3′‑羟基染料木黄酮。并且提供了3′‑羟基染料木黄酮的用途，所述3′‑羟基染料木黄酮在食品、药品或化妆品领域作为抗氧化剂使用；提供了一种抗老化化妆品，所述化妆品种包括3′‑羟基染料木黄酮；验证了3′‑羟基染料木黄酮能够抑制诱导型人基质金属蛋白酶‑1，能够抑制细胞脱颗粒，并且提供了在制备药物中的用途。

技术领域

本发明涉及一种化合物的制备方法及用途，具体涉及3′-羟基染料木黄酮的 制备方法及其用途。

背景技术

3′-羟基染料木黄酮(3'-hydroxygenistein)是大豆异黄酮的代谢产物之一。Hsiou-Yu Ding、Chien-Min Chiang等人发表在Process Biochemistry，题目为Identification of 3-hydroxygenistein as a potent melanogenesis inhibitor frombiotransformation of genistein by recombinant Pichia pastoris的文章公开了一种3′- 羟基染料木黄酮的制备方法，所述方法通过重组巴斯德毕赤酵母生物转化染料 木黄酮制备得到3′-羟基染料木黄酮，并且验证了3′-羟基染料木黄酮对于黑色素 生成的抑制作用，以及3′-羟基染料木黄酮抑制络氨酸酶的作用。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供3′-羟基染料木黄酮 的制备方法及其用途。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种3′-羟基染料木黄酮的制 备方法，所述方法包括以下步骤：

(1)将络氨酸酶基因导入大肠杆菌中制备基因重组大肠杆菌，将基因重组 大肠杆菌活化培养诱发络氨酸酶基因表现后，冷冻干燥，得到干燥后的菌粉；

(2)配制硼酸盐、抗坏血酸、染料木黄酮(Genistein)的混合溶液A，其 中所述混合溶液A的pH为8.5-9.5；

(3)按照染料木黄酮和菌粉的重量比为10:1-15向混合溶液中A加入所述 干燥后的菌粉，得到混合液B；

(4)在48-52℃下，震荡培养步骤(3)得到的混合液B，进行生物转化反 应；

(5)培养结束后，用有机溶剂萃取反应后的产物，浓缩干燥得到3′-羟基木 黄酮。

优选地，基因重组大肠杆菌的制备方法包括以下步骤：将巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)中的络氨酸酶(tyrosinase)基因融合进pETDuet-1^TM载 体，得到pETDuet-BmTYR环状重组质体，并将重组质体转入大肠杆菌 (BL21(DE3))，得到重组大肠杆菌。

染料木黄酮(Genistein)的化学结构式如式(Ⅰ)所示：

3′-羟基染料木黄酮的的化学结构式如式(Ⅱ)所示：

优选地，在所述步骤(4)中震荡培养的过程中，同时向混合液B中曝气， 所述曝气的速率为1-1.2L/L混合液B/min。

优选地，所述步骤(3)中染料木黄酮和菌粉的重量比为10:2、10:4、10:8、 10:14。

优选地，所述步骤(3)中染料木黄酮和菌粉的重量比为10:8-14。

优选地，所述硼酸盐、抗坏血酸、染料木黄酮的物质的量的比值为： 500:10-35:3-5。

更优选地，所述硼酸盐、抗坏血酸、染料木黄酮的物质的量的比值为： 500:20-32:3-5。