[发明专利]一种农杆菌介导的除草剂Basta抗性导入烟草的转化方法在审
| 申请号： | 201910142094.9 | 申请日： | 2019-02-26 |
| 公开（公告）号： | CN109825524A | 公开（公告）日： | 2019-05-31 |
| 发明（设计）人： | 贺其其;陈晓庆;武秀明 | 申请（专利权）人： | 上海迈其生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/00;A01H6/82 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200072 上海市闸北区广延路*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 抗性 除草剂Basta 农杆菌介导 烟草外植体 烟草 除草剂筛选 分化培养基 农杆菌浸染 分化培养 抗性质粒 生根诱导 阳性植株 有效减少 抗性苗 农杆菌 特美汀 阳性率 预培养 叶盘 抗生素 转化 清洗 筛选 转入 生长 检测 污染 | ||
1.一种农杆菌介导的除草剂Basta抗性导入烟草的转化方法，其特征在于，由以下步骤组成：
烟草外植体预培养；
利用已转入basta抗性质粒的农杆菌浸染烟草外植体；
共培养；
分化培养，其中分化培养基中Basta的浓度为3-5mg/mL；
生根诱导和阳性植株检测。
2.根据权利要求1所述的一种农杆菌介导的除草剂Basta抗性导入烟草的转化方法，其特征在于，所述分化培养中采用的分化培养基为4.43g/L MS+30g/L蔗糖+6-BA 1mg/L+NAA0.1mg/L+7.8g/LAgar+500mg/L Cef+Basta，pH5.8，所述Basta的浓度为4mg/mL。
3.根据权利要求1或2所述的一种农杆菌介导的除草剂Basta抗性导入烟草的转化方法，其特征在于，转化方法为：将预培养的烟草外植体置于用转化液重悬的农杆菌菌液中，菌液调整OD600为0.5-0.6，然后黑暗条件下30℃，200r/min震荡培养20min。
4.根据权利要求1或2所述的一种农杆菌介导的除草剂Basta抗性导入烟草的转化方法，其特征在于，所述共培养的培养条件为：28度下暗培养2-3天。
5.根据权利要求4所述的一种农杆菌介导的除草剂Basta抗性导入烟草的转化方法，其特征在于，所述共培养前采用特美汀清洗叶盘。
6.根据权利要求5所述的一种农杆菌介导的除草剂Basta抗性导入烟草的转化方法，其特征在于，所述特美汀的浓度为320-640mg/L。
7.根据权利要求6所述的一种农杆菌介导的除草剂Basta抗性导入烟草的转化方法，其特征在于，所述特美汀的浓度为640mg/L。
8.根据权利要求7所述的一种农杆菌介导的除草剂Basta抗性导入烟草的转化方法，其特征在于，所述特美汀的清洗次数为3次，清洗时间为：第一次30分钟，后两次10分钟。
9.根据权利要求1或2所述的一种农杆菌介导的除草剂Basta抗性导入烟草的转化方法，其特征在于，所述共培养的培养基为4.43g/LMS+30g/L蔗糖+6-BA1mg/L+NAA 0.1mg/L+7.8g/LAgar+200μL/LAS，pH5.8。
10.根据权利要求1或2所述的一种农杆菌介导的除草剂Basta抗性导入烟草的转化方法，其特征在于，所述生根诱导和阳性植株检测中，生根诱导的培养基为4.43g/LMS+30g/L蔗糖+IAA 0.3mg/L+7.8g/LAgar+500mg/L Cef，pH5.8；阳性植株检测为利用基因组DNA进行PCR检测。
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