[发明专利]p28-Fc融合蛋白及其编码核酸分子、重组表达载体、重组细胞和应用

说明书

本发明提供p28‑Fc融合蛋白及其编码核酸分子、重组表达载体、重组细胞和应用，涉及药物技术领域，所述p28‑Fc融合蛋白，由hIL‑27p28和Fc组成。人IL‑27p28的信号肽编码区有不利于哺乳动物表达的碱基序列，为了获得正确构型的IL‑27p28，本发明所述hIL‑27p28含有Hongeybee melittin secretion信号肽，以替代人IL‑27p28信号肽，从而克服异源表达时无法获得构型正确的可溶性IL‑27p28的问题。本发明还提供了所述p28‑Fc融合蛋白及其编码核酸分子、重组表达载体或重组细胞在制备治疗自身免疫性疾病的药物中的应用。

技术领域

本发明涉及药物技术领域，尤其涉及p28-Fc融合蛋白及其编码核酸分子、重组表达载体、重组细胞和应用。

背景技术

白介素-27(IL-27)是IL-12家族(IL-12、IL-23、IL-27和IL-35)中的一员。IL-12家族细胞因子都由一条α链(p19、p28或p35)和一条β链(p40或EBI3)组成，例如IL-27是由p28和EBI3(EB病毒诱导基因3)组成的[Pflanz,S.et al.(2002)Immunity 16:779.]。IL-27p28也被称为IL27，p28，IL30，IL-27，IL27p28等。

p28是一个与IL-12的p35相似的多肽，而EBI3则是一个与IL-12/IL-23的p40相似的蛋白。IL-27与TCCR/WSX-1和gp130形成的异源二聚体受体复合物结合，gp130是IL-6家族的细胞因子共有的一个受体亚基[Pflanz,S.et al.(2004)J.Immunol.172:2225]。

IL-27是主要的抑制性细胞因子，但可能有些促炎效应。IL-27常时在局部抗原呈递细胞激发的自身免疫反应的消退期生成。此外，广泛的刺激(包括nTreg细胞，IFN-β，Toll样受体的配体和他汀类药物)通过抗原呈递细胞诱导IL-27的生产，从而限制炎症的发展。

虽然IL-27单独作用没有明显的直接促炎效应，但是在IL-12和/或IL-2的联合作用下，它可以通过T细胞和自然杀伤细胞诱导IFN-β产生。IL-2限制nTreg和T细胞的分化，而IL-27可以抑制IL-2的产生，但是IL-2又可以通过抑制IL-27R(WSX-1)的表达而拮抗这种效应。IL-27能抑制Th17细胞的发育和诱导IL-10分泌性Tr1细胞样调节亚群的发育，部分作用是通过诱导c-Maf而发挥作用[Batten,M.et al.(2006)Nat.Immunol.7:929.Stumhofer,J.S.et al.(2006)Nat.Immunol.7:937]。

Crabe等介绍了p28亚基和细胞因子样因子1(CLF)组成另一种分泌复合物[Crabe,S.et al.(2009)J.Immunol.183:7692]。与IL-27相似，p28/CLF也由激活的树突状细胞分泌，但它需要TCCR/WSX-1、gp130和IL-6Rα来传递信号。与IL-27不同，p28/CLF不仅能抑制小鼠幼稚CD4⁺T细胞的增殖，也能在TGF-β存在时诱导IL-17的表达。在接着用PMA/离子毒素重新刺激后，IL-17的表达水平与TGF-β和IL-6的诱导相当，这表明p28/CLF在促进小鼠Th17分化上可替代IL-6。以上的研究认为IL-27p28是与Ebi3或CLF等形成异源二聚体而共分泌。