[发明专利]一种从造血干细胞分化产生NK细胞的方法及其培养基在审

专利信息
申请号: 201910140579.4 申请日: 2019-02-26
公开(公告)号: CN109777773A 公开(公告)日: 2019-05-21
发明(设计)人: 顾雨春;尹乐 申请(专利权)人: 北京呈诺医学科技有限公司
主分类号: C12N5/0783 分类号: C12N5/0783
代理公司: 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 代理人: 关畅
地址: 100176 北京市大兴区北京经济*** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 造血干细胞分化 分化培养基 基础培养基 造血干细胞 半量换液 分化 基因修饰 重要意义 高纯度 接种 成功
【说明书】:

发明公开了一种从造血干细胞分化产生NK细胞的方法。本发明所提供的从造血干细胞分化产生NK细胞的方法包括如下步骤:(a)将造血干细胞接种于NK分化培养基I(NK分化基础培养基+SCF、IL3、IL7、IL15和Flt3‑L)中,进行培养;(b)7天后,采用NK分化培养基II进行半量换液,继续培养;之后每隔5‑7天使用所述NK分化培养基II(NK分化基础培养基+SCF、IL15、IL7和Flt3‑L)进行半量换液,直至培养获得造血干细胞来源的NK细胞。实验证明,本发明方法可以成功从造血干细胞分化产生NK细胞。本发明对于获得高纯度特定基因修饰的NK细胞以及工业化生产具有重要意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域,具体涉及一种从造血干细胞分化产生NK细胞的方法及其培养基。

背景技术

NK细胞的杀伤活性无MHC限制,不依赖抗体,因此称为自然杀伤活性。NK细胞没有T细胞和B细胞所具的受体,不会进行受体的基因重组。但仍具有一些特殊受体,可以活化或抑制其作用。NK细胞与杀死肿瘤细胞有关,可利用分泌穿孔素及肿瘤坏死因子,摧毁目标细胞。此外,NK细胞可以进行体外扩增,但由于NK细胞自身特点,难以对其进行基因修饰(慢病毒感染效率低)。因此,体外分化获得NK细胞具有重要意义。

诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS细胞)较易进行基因修饰,基因修饰后的iPS细胞可以分化产生造血干细胞(Hematopoietic stem cell,HSC),将造血干细胞进一步分化获得的NK细胞即为基因修饰的NK细胞。截止目前,尚无造血干细胞体外分化形成NK细胞的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种从造血干细胞(HSC)分化产生NK细胞的方法。

第一方面,本发明要求保护一种从造血干细胞分化产生NK细胞的方法。

本发明所提供的从造血干细胞分化产生NK细胞的方法,可包括如下步骤:

(a)将造血干细胞接种于NK分化培养基I中,培养6-8天(如6天、7天或8天);

所述NK分化培养基I可为在NK分化基础培养基中加入细胞因子SCF、IL3、IL7、IL15和Flt3-L后得到的培养基;

(b)完成步骤(a)后,采用NK分化培养基II进行半量换液,继续培养;培养期间每隔5-7天(如5天、6天或7天)使用所述NK分化培养基II进行半量换液,直至获得NK细胞(即造血干细胞来源的NK细胞);

所述NK分化培养基II可为在所述NK分化基础培养基中加入细胞因子SCF、IL15、IL7和Flt3-L后得到的培养基。

所述NK分化基础培养基可包括DMEM高糖培养基、“Ham's F-12 Nutrient Mix,GlutaMAXTMSupplement培养基”、热灭活人AB血清、L-谷氨酸、2-巯基乙醇、亚硒酸钠、氨基乙醇和L-抗坏血酸。

所述NK分化基础培养基具体可由DMEM高糖培养基、“Ham's F-12 Nutrient Mix,GlutaMAXTMSupplement培养基”、热灭活人AB血清、L-谷氨酸、2-巯基乙醇、亚硒酸钠、氨基乙醇和L-抗坏血酸组成。

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