[发明专利]一种提高种公猪精子活力激动剂的制备方法

说明书

本发明涉及一种提高种公猪精子活力激动剂的制备方法，包括以下步骤：(1)取出小公猪睾丸组织浸润；(2)用PBS缓冲液清洗；(3)加入细胞培养液培养，离心去上清；(4)加入透明质酸酶和胶原酶IV震荡，加入细胞培养液离心去上清；(5)加入胰蛋白酶和脱氧核糖核酸酶震荡，加入细胞培养液(6)细胞筛过滤；(7)离心去上清液，加细胞培养液；(8)细胞培养传代；(9)将细胞液培养、保存，即得。本发明的优点是应用效果好、成本低、容易加工生产。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种提高种公猪精子活力激动剂的制备方法。

背景技术

种公猪精子品质在公猪管理工作中有至关重要的作用，精子质量直接关系到猪场的配种受胎率和产仔数，进而影响整个猪场经济效益。种公猪采精后检查精液，有助于了解种公猪精子状态，掌握种公猪的繁殖性能。精子的常规检查包括精液的量、气味、色泽、活力和密度，其中精子活力作为表征公猪精子质量好坏的一个重要指标，应用十分广泛。精子活力是指精液中运动精子所占的百分率。由于只有具有运动的精子才可能具有正常的生存能力和受精能力，所以精子活力与雌性受胎率密切相关，从而它是目前评定精液品质优劣的常规检查的主要指标之一。如能有效的提高精子活力，势必会提高种猪的繁殖率，进而提高猪场的经济效益。因此，制备能够显著提高种公猪精子活力的激动剂，具有重要意义。

目前，提高种公猪精子活力的方法主要为(1)肌肉注射睾丸酮，具体注射方法为一天一次，连续注射三天。(2)人工喂服雅士勇。具体饲喂方法为与脱霉剂，多维素，维生素A、B、D，生育酚，胡萝卜素等混合，搅拌于猪饲料中，连续喂服一周。(3)加强公猪运动，每天喂生鸡蛋，胡萝卜等方法。

在利用以上方法提高公猪精子活力的过程中发现：(1)所述的肌肉注射睾丸酮属于雄性激素类药物，注射睾丸酮虽然可使公猪性欲亢进，但长期使用可致公猪睾丸萎缩，精子生成受抑制，还可能会出现红细胞增多，呕吐，皮疹，神经血管性水肿，肝功能异常等副作用，对于公猪产精年限也有一定影响。(2)中雅士勇主要成分为左旋肉碱、天门冬氨酸、VB₁、麦氨酸、VB₆、甘氨酸等，雅士勇虽然能有有效提高提高种畜禽受精率，降低死淘率，但有研究发现：“雅士勇”口服液对大白猪和长白猪射精量无明显影响，且“雅士勇”为意大利进口种公猪保健品，价格相对较高。(3)中所述加强公猪运动，每天喂生鸡蛋，胡萝卜等方法，实际生产中发现对于提高种公猪精子活力有限，且用时较长。

发明内容

针对现有技术提高种公猪精子活力的缺陷，本发明的目的在于提供一种成本低廉、使用方便、效果显著、毒害作用小的提高种公猪精子活力激动剂的制备方法，本发明制备的种公猪精子激动剂，体外使用、应用效果好、成本低、容易加工生产，具有较好的市场前景。

本发明具体通过以下技术方案实现：

一种提高种公猪精子活力激动剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)取出小公猪睾丸组织，放入加有1％双抗的37℃生理盐水中浸润10～30min；

(2)取出浸润后的公猪睾丸组织，用含有1％双抗的PBS缓冲液清洗三遍；

(3)加入DMEM/F12细胞培养液，37℃下培养30min，充分分解睾丸组织，将分散后的组织液转移至离心管中，离心去上清液；

(4)在离心管中加入1.5mL透明质酸酶和1.5mL胶原酶IV，在37℃下，每隔2分钟剧烈震荡一次，连续震荡2～3次后，加入3mL的DMEM/F12细胞培养液，离心去上清液；

(5)在离心管中加入1.5mL胰蛋白酶和1.5mL脱氧核糖核酸酶，在37℃下，每隔2分钟剧烈震荡一次，连续震荡2～3次后，加入3mL的DMEM/F12细胞培养液；

(6)将细胞液依次用80、200、300目的细胞筛过滤；