[发明专利]一种检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法

说明书

本发明公开了一种检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法，包括以下步骤：（1）无菌条件下取待测样品，加入含Al(OH)₃的PBS缓冲液中，均质，获得样品菌液；（2）对样品菌液进行水浴热处理，离心，弃上清，收集菌体；（3）向菌体中加入小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠，振荡后于磁力架上静置分层，弃上层，得到吸附有菌体的小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠；用洗脱液对吸附有菌体的小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠进行洗脱，然后向洗脱后的小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠中加入PBS缓冲液，混合均匀，得到样品待测液；（4）将待测样品液进行培养、观察、检测。本发明提供的检测方法特异性强，灵敏度高，而且能有效缩短检测时间，降低检测成本。

技术领域

本发明属于微生物检测技术领域，具体涉及一种检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法。

背景技术

小肠结肠炎耶尔森氏菌(Y.enterocolitica)是一种广泛分布于自然界的人畜共患致病性微生物，存在于生的蔬菜、乳和乳制品、肉类、豆制品、沙拉、牡蛎、蛤和虾中，也存在于环境中，如湖泊、河流、土壤和植被。目前已从家畜、狗、猫、山羊、灰鼠、水貂和灵长类动物的粪便中分离出该菌。小肠结肠炎耶尔森氏菌能够通过食物传播，能够引起多种动物以及人的小肠结肠炎耶尔森氏菌病，感染后主要症状表现为发热、腹痛、腹泻、呕吐、关节炎、败血症等，严重危害人类健康。正因如此，很多国家规定，对于进出口的食品该菌是必检的常规项目。

目前小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测方法，还主要依赖于传统的微生物学检测方法。常规的检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法操作步骤复杂，并且费时，一般要3～7天，不能达到快速检测食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的要求。因此，迫切需要建立一种快速、有效的检测食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法，以实现对小肠结肠炎耶尔森氏菌进行快速检测，及早发现传染源，切断其传播途径。

发明内容

针对现有技术存在的问题和不足，本发明的目的旨在提供一种检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法。

为实现发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法，包括以下步骤：

(1)无菌条件下取待测样品，加入含Al(OH)₃的PBS缓冲液中，均质，获得样品菌液；

(2)对样品菌液进行水浴热处理，然后离心，弃上清，收集菌体；

(3)向菌体中加入小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠，经混合、振荡后于磁力架上静置分层，弃上层，得到吸附有菌体的小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠；用洗脱液对吸附有菌体的小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠进行洗脱，然后向洗脱后的小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠中加入PBS缓冲液，混合均匀，得到样品待测液；

(4)将待测样品液进行培养、观察、检测。

根据上述的检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法，优选地，步骤(1)中所述待测样品与PBS缓冲液的质量比为1:9，所述PBS缓冲液中Al(OH)₃的质量浓度为0.5％～10％。

根据上述的检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法，优选地，步骤(2)中所述水浴热处理的温度为30℃～80℃，水浴时间为5min～30min。

根据上述的检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法，优选地，步骤(2)中所述离心温度为4℃，转速为4000rpm，离心时间为1min～5min。

根据上述的检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法，优选地，步骤(3)中所述振荡时间为1min～3min。