[发明专利]一种基于脱细胞真皮基质的水凝胶及其制备方法

权利要求书

1.一种基于脱细胞真皮基质的水凝胶，其特征在于，所述水凝胶以脱细胞真皮基质为原材料，经过胃蛋白酶酶解，清洗，冻干，粉碎，利用Ca²⁺和EDC/NHS进行交联；

所述基于脱细胞真皮基质的水凝胶的制备方法如下：

（1）制备脱细胞真皮基质：

①取储存的人源皮肤，清除皮下附带脂肪成分；

②步骤①清除皮下附带脂肪成分的皮肤用碘伏及酒精清洗消毒，后用低渗溶液反复浸泡清洗皮肤；

③将步骤②清洗后的皮肤用2.5mg/mL DispaseII溶液处理过夜；弃去DispaseII溶液，去除表皮，后用生理盐水清洗，获得真皮；

④将步骤③获得的真皮用含有Ca²⁺的高渗盐溶液处理12-24h；弃去高渗盐溶液后，用生理盐水清洗；

⑤将步骤④清洗后的真皮置于配制好的“脱细胞液”中，在“透析装置”中处理2h-6h，获得脱细胞真皮基质；

⑥用生理盐水清洗3次，每次15min，得到人源的脱细胞真皮基质；

（2）胃蛋白酶酶解：向步骤（1）获得的脱细胞真皮基质中加入1%-5%的胃蛋白酶溶液，室温下搅拌酶解12-15h；

（3）清洗：将步骤（2）酶解后的脱细胞真皮基质过滤取沉淀，将沉淀用生理盐水清洗；

（4）冻干：将步骤（3）清洗后的脱细胞真皮基质沉淀在冻干机中冻干12-15h；

（5）粉碎：将步骤（4）冻干后的脱细胞真皮基质沉淀用超微粉碎机粉碎3-5min，获得脱细胞真皮基质粉末；

（6）交联：在步骤（5）获得的脱细胞真皮基质粉末中加入蒸馏水，使其形成浓度为0.01g/mL-0.5g/mL的溶液，随后加入交联液，充分混合；将混合后的溶液在-80℃条件下冷冻6h，冻干即获得水凝胶；

步骤⑤所述的“脱细胞液”包含以下组分：0.1%-0.5wt%胰酶，0.5-5mM EDTA，0.1%-0.5wt% TritonX-100，Na⁺ 0.1-0.5mol/L，Cl^- 0.l-0.5mol/L，Ca²⁺ l-10mmol/L；Ca²⁺来自Ca(NO₃)₂，NO₃^- 2-20mmol/L；或包含以下组分：0.1%-0.5wt%胰酶，0.5-5mM EDTA，0.1%-0.5wt%TritonX-100，Na⁺ 0.1-0.5mol/L，Cl^- 0.l-0.5mol/L，Ca²⁺ l-10mmol/L；Ca²⁺来自CaCl₂。

2.根据权利要求1所述的一种基于脱细胞真皮基质的水凝胶，其特征在于，步骤（1）制备脱细胞真皮基质：②步骤①清除皮下附带脂肪成分的皮肤，用2%碘伏清洗消毒，用75%酒精脱碘，再用无菌蒸馏水反复浸泡清洗皮肤。

3.根据权利要求1所述的一种基于脱细胞真皮基质的水凝胶，其特征在于，步骤（1）制备脱细胞真皮基质：④将步骤③获得的真皮用0.5-3mol/L含有Ca²⁺的高渗盐溶液处理12-24h，Ca²⁺的终浓度为1-10mM/L。

4.根据权利要求3所述的一种基于脱细胞真皮基质的水凝胶，其特征在于，步骤（1）制备脱细胞真皮基质：步骤④所述高渗盐溶液为0.5-3mol/L含有Ca²⁺的氯化钠溶液，Ca²⁺的终浓度为1-10mM/L。

5.根据权利要求1所述的一种基于脱细胞真皮基质的水凝胶，其特征在于，所述交联液为含有Ca²⁺和EDC/NHS的DPBS缓冲液，Ca²⁺浓度为50-200μM/L，EDC/NHS浓度为50-1000mM/L。