[发明专利]检测PEAR1基因rs12041331位点多态性的人工模拟核酸分子信标与试剂盒

说明书

本发明公开了一种PEAR1基因rs12041331位点多态性的分型检测方法与试剂盒。本发明采用PEAR1基因特异性的引物SEQ1和SEQ2扩增PEAR1基因片段，同时在PEAR1基因特异性的引物界定的扩增区域内设计PEAR1基因特异性人工模拟核酸分子信标SEQ3‑FAM和SEQ4‑VIC。本发明提供的基于基因特异性PCR结合人工模拟核酸分子信标判断PEAR1基因rs12041331位点多态性的方法不仅准确率高，而且还具有检测速度快、操作简单、结果判读客观、闭管反应污染少等优点，非常适合于在临床中大规模开展。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及PEAR1基因rs12041331位点多态性的分型检测方法与试剂盒。

背景技术

急性冠状动脉综合征（ACS）是由于冠状动脉粥样硬化斑块破裂或侵袭，从而产生血栓，导致冠状动脉血流减少的一组临床综合征。由于冠状动脉血流减少，导致部分心肌无法正常运作或死亡。其最常见的症状是胸痛，常常向左肩或下颌角蔓延，并伴有恶心和出汗。许多ACS患者会出现胸痛以外的症状，尤其是女性、老年患者和糖尿病患者。

目前阿司匹林和氯吡格雷的双重抗血小板治疗是最常用于治疗ACS患者的方案。尽管该方案在大多数患者中有效，但仍存在着显著的个体差异。已有的结果表明，氯吡格雷和阿司匹林的治疗反应受到遗传变异的影响。其中血小板内皮细胞聚集受体1（PEAR1）是与阿司匹林反应相关的基因。它编码1型膜蛋白，通过增强血小板αIIbβ3活化参与巨核细胞和血小板形成，并使血小板的聚集稳定。在PEAR1的遗传变异中，rs12041331（A/G）可以改变它的表达。与G携带者相比，A携带者的阿司匹林肾上腺素诱导的血小板聚集显著降低，且AA诱导的血小板聚集不受阿司匹林剂量的影响。因此，rs12041331（A/G）位点多态性的检测有助于针对不同的ACS患者提供合理的用药治疗方案。

目前，基因多态性检测的方法主要有PCR-Sanger测序法、芯片杂交法、高分辨率溶解曲线法等。这些方法虽然都可以在一定程度上检测基因多态性，但都有不可忽视的局限性。Sanger测序法步骤较多，需要PCR后处理，不仅操作繁琐，还易产生污染，并不能满足临床的需求。芯片杂交法操作繁琐，其检测还依赖于昂贵的设备仪器，导致成本较高。高分辨率溶解曲线法对仪器要求高，需要具有安装高分辨率软件、温度比较敏感的机器才能使用，临床推广存在困难。基于Taqman水解探针的荧光定量PCR，利用Taq酶的外切酶活性，切断探针产生荧光信号，由于Taqman探针荧光基团与淬灭基团并不紧密靠近，导致荧光淬灭不彻底，存在背景荧光信号。此外，Taqman探针对于单碱基错配识别能力较差，极易生成非特异荧光信号，干扰结果判读，进而影响检测的准确性。因此，临床上迫切需要一种简便易行、灵敏度高、准确可靠的检测基因多态性的方法。