[发明专利]羰基还原酶突变体、编码基因、重组载体和表达转化体及其在制备(R)-烷基内酯的应用

权利要求书

1.一种羰基还原酶突变体，其特征在于：所述羰基还原酶突变体是如下序列中的一种：

(1)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第123位精氨酸替换为半胱氨酸；

(2)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第123位精氨酸替换为半胱氨酸，第89位异亮氨酸替换为亮氨酸；

(3)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第123位精氨酸替换为半胱氨酸；同时119位赖氨酸替换为精氨酸；

(4)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第123位精氨酸替换为半胱氨酸，第61位缬氨酸替换为丙氨酸；

(5)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第123位精氨酸替换为半胱氨酸，第209位亮氨酸替换为脯氨酸；

(6)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第123位精氨酸替换为半胱氨酸，第209位亮氨酸替换为脯氨酸，第183位苯丙氨酸替换为酪氨酸；

(7)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第123位精氨酸替换为半胱氨酸，第209位亮氨酸替换为脯氨酸，第184位异亮氨酸替换为缬氨酸；

(8)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第123位精氨酸替换为半胱氨酸，第209位亮氨酸替换为脯氨酸，第61位缬氨酸替换为赖氨酸；

(9)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第123位精氨酸替换为半胱氨酸，第209位亮氨酸替换为脯氨酸，第142位苏氨酸替换为异亮氨酸；

(10)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第123位精氨酸替换为半胱氨酸，第209位亮氨酸替换为脯氨酸，第159位异亮氨酸替换为亮氨酸；

(11)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第123位精氨酸替换为半胱氨酸，第209位亮氨酸替换为脯氨酸，第61位缬氨酸替换为赖氨酸，第184位异亮氨酸替换为缬氨酸；

(12)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第123位精氨酸替换为半胱氨酸，第209位亮氨酸替换为脯氨酸，第61位缬氨酸替换为赖氨酸，第183位苯丙氨酸替换为酪氨酸；

(13)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第123位精氨酸替换为半胱氨酸，第209位亮氨酸替换为苏氨酸，第61位缬氨酸替换为赖氨酸，第183位苯丙氨酸替换为酪氨酸；

(14)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第123位精氨酸替换为半胱氨酸，第209位亮氨酸替换为苏氨酸，第61位缬氨酸替换为赖氨酸，第183位苯丙氨酸替换为酪氨酸，184位异亮氨酸替换为缬氨酸；

(15)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第123位精氨酸替换为半胱氨酸，第209位亮氨酸替换为丙氨酸，第61位缬氨酸替换为赖氨酸，第183位苯丙氨酸替换为酪氨酸，184位异亮氨酸替换为缬氨酸；

(16)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第123位精氨酸替换为半胱氨酸，第209位亮氨酸替换为脯氨酸，第61位缬氨酸替换为赖氨酸，第183位苯丙氨酸替换为酪氨酸，184位异亮氨酸替换为缬氨酸。

2.一种核酸，编码如权利要求1所述的羰基还原酶突变体。

3.一种重组表达载体，包含如权利要求2所述的核酸。

4.一种重组表达转化体，包含如权利要求3所述的重组表达载体。

5.权利要求1中所述的羰基还原酶突变体的制备方法，其步骤包括：培养如权利要求4所述的重组表达转化体，分离表达的羰基还原酶突变体。

6.根据权利要求5所述的羰基还原酶突变体的制备方法，其特征在于：制备方法为以下任意一种：

(1)培养如权利要求4所述的重组表达转化体，分离含有所述羰基还原酶突变体的转化体细胞；

(2)培养如权利要求4所述的重组表达转化体，分离含有所述羰基还原酶突变体的粗酶液；

(3)培养如权利要求4所述的重组表达转化体，分离含有所述羰基还原酶突变体的粗酶液，将所述羰基还原酶突变体的粗酶液干燥得到粗酶粉。